| 提要 | 第1-12页 |
| 英文缩略词 | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-44页 |
| 第一节 急性心肌梗塞实验室诊断进展 | 第15-24页 |
| 1 传统MI Marker再认识 | 第16-18页 |
| 2 MI Marker进展 | 第18-24页 |
| ·心肌坏死标志物 | 第20页 |
| ·心肌缺血指标 | 第20-22页 |
| ·血栓形成标志物 | 第22-23页 |
| ·脂质斑块破裂的标志物 | 第23-24页 |
| 第二节 H-FABP临床应用研究进展 | 第24-33页 |
| 1 FABP的性质和特征 | 第24-26页 |
| 2 FABP的结构特点 | 第26-27页 |
| 3 H-FABP的临床应用 | 第27-33页 |
| ·应用于AMI早期诊断 | 第27-30页 |
| ·应用于AMI再灌注的判断 | 第30页 |
| ·应用于推测AMI的梗塞面积 | 第30-31页 |
| ·监测AMI复发 | 第31-32页 |
| ·应用于AMI以外的心血管疾病 | 第32-33页 |
| 第三节 外源蛋白质表达系统研究的进展 | 第33-39页 |
| 1 原核表达体系 | 第33-36页 |
| 2 真核表达体系 | 第36-39页 |
| 第四节 H-FABP测定方法研究进展 | 第39-41页 |
| 第五节 实验设计 | 第41-44页 |
| 1 中心思想 | 第41页 |
| 2 实验步骤 | 第41-44页 |
| 第二章 H-FABP表达载体的构建、表达和纯化 | 第44-93页 |
| 第一节 H-FABP表达载体的构建 | 第44-63页 |
| 1 材料和方法 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·菌种和质粒 | 第44-45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-52页 |
| 3 结果 | 第52-56页 |
| ·人胎心肌组织总RNA(T-RNA)的提取 | 第52页 |
| ·逆转录PCR扩增人H-FABP | 第52-53页 |
| ·重组克隆载体的双酶切鉴定 | 第53页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组质粒序列分析 | 第54-55页 |
| ·重组表达质粒的PCR鉴定 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-63页 |
| ·人胎心肌组织(messenger RNA，mRNA)的提取 | 第56-57页 |
| ·紫外分光光度计测定总RNA浓度 | 第57页 |
| ·pBV-H-FABP、pQE-H-FABP、pPICZ-H-FABP引物设计策略 | 第57-58页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第58页 |
| ·质粒的小量提取 | 第58-59页 |
| ·三种表达系统的比较 | 第59-63页 |
| 第二节 H-FABP的表达和纯化 | 第63-93页 |
| 1 材料和方法 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| 2 实验方法 | 第63-73页 |
| ·重组菌的表达筛选 | 第63-64页 |
| ·蛋白质的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第64-66页 |
| ·最适表达条件的优化 | 第66-68页 |
| ·H-FABP的Western blotting分析 | 第68-69页 |
| ·重组蛋白的可溶性检查 | 第69页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第69-72页 |
| ·二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白含量 | 第72-73页 |
| 3 结果 | 第73-80页 |
| ·重组菌的表达筛选 | 第73-74页 |
| ·pQE-H-FABP最适IPTG浓度和时间的优化 | 第74-76页 |
| ·pBV-H-FABP的时间表达动力学 | 第76页 |
| ·pPICZ-H-FABP最适pH动力学的优化 | 第76-77页 |
| ·pQE-H-FABP和pBv-H-FABP重组蛋白的可溶性检查 | 第77页 |
| ·H-FABP的纯化和Western blotting分析 | 第77-79页 |
| ·二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白含 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-92页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌的高效表达 | 第81-88页 |
| ·真核表达 | 第88-92页 |
| 5 小结 | 第92-93页 |
| 第三章 H-FABP单克隆抗体制备和测定方法的建立 | 第93-131页 |
| 第一节 H-FABP单克隆抗体的制备 | 第95-112页 |
| 1 材料 | 第95页 |
| 2 试剂 | 第95页 |
| 3 主要仪器 | 第95-96页 |
| 4 实验方法 | 第96-105页 |
| ·动物的选择与免疫 | 第96页 |
| ·细胞融合前准备 | 第96-97页 |
| ·细胞融合 | 第97-99页 |
| ·杂交瘤细胞的检测 | 第99-100页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化培养 | 第100页 |
| ·单克隆抗体的大量生产 | 第100-101页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第101-102页 |
| ·单克隆抗体性质的鉴定 | 第102-105页 |
| 5 结果 | 第105-108页 |
| ·凝胶亲和纯化H-FABP单克隆抗体 | 第105-106页 |
| ·杂交瘤细胞染色体检查 | 第106页 |
| ·免疫球蛋白的类型及亚类测定 | 第106页 |
| ·结合位点测定 | 第106-107页 |
| ·亲和常数测定 | 第107-108页 |
| ·抗血清及腹水效价的测定 | 第108页 |
| ·特异性(交叉反应性) | 第108页 |
| 6 讨论 | 第108-112页 |
| 第二节 H-FABP测定方法的建立 | 第112-131页 |
| 1 试剂与仪器 | 第113-114页 |
| 2 实验方法 | 第114-119页 |
| 3 结果 | 第119-125页 |
| ·HRP标记抗体(4D7)的制备与纯化 | 第119-120页 |
| ·HRP、抗体的活性及工作浓度的测定 | 第120页 |
| ·HRP-抗体结合物的定量测定 | 第120-121页 |
| ·精密度测定 | 第121页 |
| ·人H-FABP ELISA测定的标准曲线制作 | 第121页 |
| ·人H-FABP ELISA测定的灵敏度 | 第121-122页 |
| ·样品的稳定性实验 | 第122-123页 |
| ·重组人H-FABP ELISA测定的准确性 | 第123页 |
| ·人H-FABP ELISA测定诊断敏感性和特异性实验 | 第123-124页 |
| ·与进口试剂盒的比较 | 第124-125页 |
| 4 讨论 | 第125-129页 |
| 5 结论 | 第129-131页 |
| 第四章 H-FABP的临床应用 | 第131-158页 |
| 第一节 H-FABP在AMI早期诊断中的应用 | 第131-145页 |
| 1 仪器与试剂 | 第131-132页 |
| 2 对象 | 第132-133页 |
| 3 方法 | 第133-134页 |
| 4 结果 | 第134-138页 |
| ·Ⅰ组血清H-FABP、MYO、cTnI、CK-MB、BUN、Cr参考值的确定 | 第134页 |
| ·85例Ⅱ、Ⅲ组患者首次心肌标志物、BUN、Cr浓度与Ⅰ组比较 | 第134-135页 |
| ·Ⅱ组、Ⅲ组心肌标志物升高时间、峰值时间、恢复时间比较 | 第135页 |
| ·AMI组各心肌标志物血清浓度变化倍数动态比较 | 第135-136页 |
| ·AMI再灌注组及非灌注组心肌标志物浓度升高时间变化比较 | 第136页 |
| ·AMI后12内各心肌标志物诊断价值比较 | 第136-138页 |
| 5 讨论 | 第138-143页 |
| ·H-FABP在早期AMI的诊断中的作用 | 第138-141页 |
| ·H-FABP作为溶栓治疗再灌注成功与否的判断指标 | 第141-143页 |
| ·H-FABP与肾功能不全 | 第143页 |
| 6 小结 | 第143-145页 |
| 第二节 H-FABP在UA诊断和治疗中的临床应用 | 第145-158页 |
| 1 仪器与试剂 | 第146页 |
| 2 对象 | 第146-147页 |
| 3 方法 | 第147-148页 |
| 4 结果 | 第148-151页 |
| ·Ⅰ组血清H-FABP、cTnI、CK-MB、CRP、BUN、Cr参考值的确定 | 第148页 |
| ·Ⅰ组与Ⅱ组患者首次心肌标志物、CRP、BUN、Cr浓度比较 | 第148页 |
| ·入院后首次Ⅱ、Ⅲ组患者心肌标志物、CRP阳性率比较 | 第148-149页 |
| ·2周内UA组心肌标志物、CRP浓度变化倍数动态比较 | 第149-150页 |
| ·Ⅱ组H-FABP、cTnI、CK-MB和CRP浓度变化与患者近期的判断 | 第150-151页 |
| 5 讨论 | 第151-156页 |
| 6 小结 | 第156-158页 |
| 第五章 研究结论 | 第158-160页 |
| 参考文献 | 第160-176页 |
| 攻读博士学位期间发表论文及其它成果 | 第176-177页 |
| 中文摘要 | 第177-182页 |
| 英文摘要 | 第182-190页 |
| 致谢 | 第190页 |
