| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语(ABBREVIATIONS) | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-31页 |
| 1 腺苷甲硫氨酸(SAM) | 第12-25页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·SAM的结构及代谢途径 | 第12-16页 |
| ·SAM的药理及应用 | 第16-19页 |
| ·肝病 | 第16页 |
| ·抑郁症 | 第16页 |
| ·关节炎 | 第16-17页 |
| ·纤维性肌痛、偏头痛 | 第17页 |
| ·其它 | 第17-18页 |
| ·应用 | 第18-19页 |
| ·SAM的稳定性及稳定性盐 | 第19-22页 |
| ·SAM的失活机理 | 第19-20页 |
| ·SAM的稳定性盐 | 第20-22页 |
| ·SAM的生产方法 | 第22-24页 |
| ·化学合成生产SAM | 第22页 |
| ·酶法合成生产SAM | 第22页 |
| ·生物转化法生产SAM | 第22-24页 |
| ·SAM的提取工艺 | 第24-25页 |
| 2 毕赤酵母表达系统 | 第25-28页 |
| ·毕赤酵母表达的宿主菌 | 第26页 |
| ·表达载体 | 第26-27页 |
| ·外源蛋白的表达和修饰 | 第27页 |
| ·应用和前景 | 第27-28页 |
| 3 发酵策略及其控制 | 第28-30页 |
| ·补料物质的种类 | 第29页 |
| ·补料策略及其控制 | 第29-30页 |
| 4 本研究的思路设计和研究目标及意义 | 第30-31页 |
| 第二章 SAM高产菌株的构建 | 第31-36页 |
| 1 材料与方法 | 第31-34页 |
| ·出发菌株 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-34页 |
| ·P.pastoris的培养 | 第32页 |
| ·SAM含量的测定 | 第32-33页 |
| ·PPIC3.5K-sam2载体的构建及SAM合成酶基因的导入 | 第33页 |
| ·GS115菌株中CBS基因的敲除 | 第33-34页 |
| 2 结果与讨论 | 第34-36页 |
| ·SAM合成酶基因的导入及CBS基因的中断均可以使毕赤酵母中的SAM产量提高 | 第34-35页 |
| ·GS115菌株中,SAM合成酶基因的导入和CBS基因的敲除相结合,会产生协同效应,使SAM产量大幅度增加 | 第35-36页 |
| 第三章 摇瓶发酵条件的研究 | 第36-41页 |
| 1 材料和方法 | 第36-38页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·试剂和仪器 | 第36-37页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·仪器 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·菌种保藏 | 第37页 |
| ·种子活化 | 第37页 |
| ·摇瓶发酵 | 第37页 |
| ·生物量的测定 | 第37-38页 |
| ·SAM含量的测定 | 第38页 |
| 2 实验结果与讨论 | 第38-41页 |
| ·L-MET浓度对SAM累积的影响 | 第39页 |
| ·甲醇浓度对SAM合成和累积的影响 | 第39页 |
| ·初始pH对SAM累积的影响 | 第39-41页 |
| 第四章 发酵罐发酵工艺的研究 | 第41-67页 |
| 1 材料与方法 | 第41-47页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·实验仪器及设备 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-46页 |
| ·培养方法及产物转化方法 | 第42-43页 |
| ·发酵产物产量的测定 | 第43页 |
| ·生物量的测定 | 第43页 |
| ·酵母镜检的活体染色法 | 第43页 |
| ·甲醇浓度的测定 | 第43-45页 |
| ·发酵液中L-Met残留量的测定 | 第45-46页 |
| ·发酵工艺路线 | 第46-47页 |
| ·一级种子的制备 | 第46页 |
| ·二级种子的制备 | 第46页 |
| ·上罐 | 第46-47页 |
| 2 结果与讨论 | 第47-67页 |
| ·5L发酵罐工艺的研究 | 第47-60页 |
| ·pH调控工艺的确定 | 第47页 |
| ·溶氧调控工艺的确定 | 第47-48页 |
| ·发酵温度的控制 | 第48-49页 |
| ·补料工艺的确定 | 第49-57页 |
| ·发酵周期 | 第57-59页 |
| ·发酵动力学曲线 | 第59页 |
| ·5L发酵工艺小结 | 第59-60页 |
| ·20L发酵工艺 | 第60-67页 |
| ·5L发酵工艺的放大 | 第60-63页 |
| ·甲醇消耗速度的变化 | 第63页 |
| ·发酵周期 | 第63-65页 |
| ·发酵动力学曲线 | 第65页 |
| ·20L发酵工艺小结 | 第65-67页 |
| 第五章 SAM提取纯化工艺初探 | 第67-76页 |
| 1 材料与方法 | 第67-69页 |
| ·标准品和其他试剂 | 第67页 |
| ·离子交换树脂 | 第67页 |
| ·实验仪器 | 第67-68页 |
| ·SAM的提取 | 第68页 |
| ·高氯酸抽提 | 第68页 |
| ·有机溶剂处理 | 第68页 |
| ·冻融法 | 第68页 |
| ·超声波破碎 | 第68页 |
| ·离子交换树脂的预处理与装柱 | 第68-69页 |
| ·树脂交换容量的测定 | 第69页 |
| ·SAM对甲苯磺酸硫酸盐的制备 | 第69页 |
| 2 结果与讨论 | 第69-76页 |
| ·从酵母细胞中抽提SAM | 第69-70页 |
| ·离子交换树脂的筛选 | 第70-71页 |
| ·解析条件的确定 | 第71页 |
| ·SAM硫酸盐的结晶 | 第71-72页 |
| ·SAM对甲苯磺酸硫酸双盐的制备 | 第72-74页 |
| ·SAM提取纯化工艺小结 | 第74-76页 |
| 第六章 展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 附录 | 第86页 |