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鸡马立克氏病病毒TaqMan探针双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

1 引言第1-27页
   ·病原第9-12页
   ·流行病学第12页
   ·MD 的发病机制第12-16页
     ·早期溶细胞感染第13页
     ·潜伏感染期第13-14页
     ·第二次溶细胞性感染第14页
     ·肿瘤细胞增生的转化期第14-16页
     ·免疫抑制第16页
   ·毒力的漂移第16-18页
   ·诊断技术第18-23页
     ·病毒分离第18页
     ·病毒抗原和抗体的检测第18页
     ·DNA 探针技术第18页
     ·聚合酶链反应(PCR) 技术第18-23页
   ·免疫接种第23-27页
     ·常规MD 疫苗的类型第23-24页
     ·MD 基因工程疫苗第24-27页
2 实验一 血清1 型马立克氏病病毒双重荧光定量PCR 检测方法的建立及应用第27-41页
   ·材料第27页
     ·毒株和菌种第27页
     ·病料第27页
     ·试剂与工具酶第27页
     ·主要仪器第27页
   ·实验方法第27-32页
     ·MDV1 的FQ-PCR 引物/探针第27-28页
     ·动物试验第28页
     ·病毒培养第28页
     ·病毒DNA 提取第28-29页
     ·常规PCR第29页
     ·阳性标准品的制备第29-31页
     ·MDV1 双重FQ-PCR 不交叉反应第31页
     ·MDV1 双重FQ-PCR 检测方法的重复性及敏感性试验第31页
     ·MDV1 双重FQ-PCR 检测方法的特异性试验及对样品的检测第31页
     ·琼脂扩散试验第31-32页
   ·实验结果第32-38页
     ·全基因组的获得第32页
     ·MEQ 基因及OVO 基因PCR 扩增结果第32页
     ·Meq 基因及Ovo 基因鉴定结果第32-34页
     ·MDV1 双重 FQ-PCR 不交叉反应实验结果第34-35页
     ·MDV1 双重 FQ-PCR 检测方法的重复性及敏感性试验结果第35-37页
     ·MDV1 双重 FQ-PCR 检测方法的特异性试验及对样品的检测结果第37-38页
     ·琼脂扩散试验结果第38页
   ·讨论第38-41页
3 实验二 三种血清型马立克氏病病毒FQ-PCR 检测方法的建立及其在疫苗研究中的应用第41-63页
   ·材料第41页
     ·毒株和菌种第41页
     ·试剂与工具酶第41页
     ·主要仪器第41页
   ·实验方法第41-46页
     ·MDV 的FQ-PCR 引物/探针第41-42页
     ·病毒培养第42页
     ·病毒DNA 提取第42页
     ·常规PCR 反应第42页
     ·阳性标准品的制备第42-44页
     ·MDV 双重FQ-PCR 不交叉反应第44页
     ·MDV 双重FQ-PCR 检测方法的重复性及敏感性试验第44页
     ·MDV 双重FQ-PCR 检测方法的特异性试验第44页
     ·MDV 双重FQ-PCR 检测方法在疫苗株体外增殖研究中的应用第44-46页
   ·实验结果第46-60页
     ·全基因的获得第46页
     ·DNA 聚合酶及SORF1 基因 PCR 扩增结果第46-47页
     ·DNA 聚合酶基因及SORF1 基因鉴定结果第47-49页
     ·MDV1、MDV2、MDV3 双重FQ-PCR 不交叉反应实验结果第49-50页
     ·MDV2、MDV3 双重FQ-PCR 检测方法的重复性及敏感性试验结果第50-52页
     ·MDV2、MDV3 双重FQ-PCR 检测方法的特异性试验第52-53页
     ·三种血清型疫苗种毒效价的测定第53-54页
     ·应用MDV1 双重FQ-PCR 检测方法测定814 株疫苗的病毒载量第54-56页
     ·应用MDV2 双重FQ-PCR 检测方法测定SBI 株疫苗的病毒载量第56-58页
     ·应用MDV3 双重 FQ-PCR 检测方法测定FC-126 株疫苗的病毒载量第58-60页
     ·双重FQ-PCR 方法测定不同时间单位蚀斑的病毒载量第60页
   ·讨论第60-63页
4 实验三 应用FQ-PCR 方法监测三种血清型疫苗毒在鸡体内动态变化规律及其免疫相关性第63-76页
   ·材料第63页
     ·毒株和疫苗株第63页
     ·细胞第63页
     ·主要试剂第63页
     ·主要器材第63页
   ·实验方法第63-65页
     ·病毒的准备第63页
     ·试验动物第63页
     ·病毒培养第63-64页
     ·病毒全基因组的提取第64页
     ·MDV 的双重FQ-PCR 检测方法检测病毒第64页
     ·三价苗的配制第64页
     ·三价苗与CV1988 免疫效力试验第64-65页
     ·统计学分析第65页
   ·结果第65-72页
     ·三价苗在鸡体内的增殖情况第65-66页
     ·单价苗 CV1988 对强毒在鸡体内复制的影响第66-67页
     ·免疫三价苗对强毒在鸡体内复制的影响第67-68页
     ·强毒对三价苗中三种血清型病毒在鸡体内复制的影响第68-71页
     ·免疫保护实验结果第71-72页
   ·讨论第72-76页
5 结论第76-77页
致谢第77-78页
参考文献第78-84页
作者简介第84页

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