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拟南芥PPR蛋白EMS15功能的初步研究

中文摘要第1-6页
Abstract第6-10页
1.引言第10-26页
   ·叶绿体起源学说第10-11页
     ·内共生起源学说第10-11页
     ·非共生起源学说第11页
   ·叶绿体的发生、结构与功能第11-14页
     ·叶绿体的发生第11-12页
     ·叶绿体的形态结构与功能第12-14页
   ·拟南芥叶绿体基因组结构与表达调控第14-18页
     ·拟南芥基因组中的多顺反子第16-17页
     ·拟南芥叶绿体基因组中依赖NEP 和依赖PEP的基因第17-18页
     ·叶绿体基因组中的内含子第18页
   ·PPR蛋白家族第18-26页
     ·PPR 家族蛋白的特征第19-20页
     ·PPR 蛋白家族的分类第20-22页
     ·PPR 基因的分布第22-23页
     ·PPR 蛋白在细胞中的定位分布分析第23-24页
     ·PPR 蛋白的分子功能第24-26页
2 材料与方法第26-47页
   ·材料第26-29页
     ·植物材料第26页
     ·主要仪器第26-27页
     ·菌株、质粒第27页
       ·菌株第27页
       ·质粒载体第27页
     ·抗生素第27-28页
     ·培养基配方第28页
     ·其它第28-29页
   ·实验方法第29-47页
     ·拟南芥种植、转化与转基因植株的筛选第29-30页
       ·拟南芥无菌培养第29页
       ·拟南芥土壤种植与农杆菌转化第29-30页
       ·转基因植株的筛选第30页
     ·T-DNA 插入突变体的鉴定第30页
     ·热击感受态E.coli 制备第30-31页
     ·大肠杆菌的转化第31-32页
     ·制备农杆菌感受态细胞第32页
     ·农杆菌的转化过程第32页
     ·克隆后载体的鉴定第32页
     ·质粒DNA 的少量制备碱裂解法第32-33页
     ·小量酶切鉴定体系第33页
     ·连接片段或载体的体系第33-34页
     ·载体构建第34-35页
       ·互补载体的构建第34页
       ·亚细胞定位载体的构建第34-35页
     ·DNA 和RNA 的抽取第35-36页
       ·DNA 的抽取第35-36页
       ·RNA 的抽取第36页
     ·RT-PCR 和Real-Time PCR第36-38页
       ·RNA 反转录合成cDNA 第一链第36-37页
       ·半定量PCR第37-38页
     ·原生质体导入亚细胞定位GFP 载体方法第38-40页
     ·透射电镜观察第40页
     ·免疫印迹杂交(Western Blot第40-42页
     ·RNA 印迹杂交(Northern Blot第42-47页
3.结果与讨论第47-60页
   ·拟南芥白化突变体ems15 及等位分析第47-48页
   ·ems15突变体的遗传互补实验第48页
   ·ems15突变体的表型分析第48-49页
   ·ems15突变体的超微结构分析第49-50页
   ·EMS15序列分析和蛋白质的亚细胞定位第50-52页
   ·EMS15蛋白定位于叶绿体中第52-53页
   ·EMS15基因的表达模式第53-54页
   ·EMS15表达产物对叶绿体基因内含子剪切的影响第54-55页
   ·EMS15对叶绿体多顺反子前体RNA 裂解的影响第55-56页
   ·EMS15 对叶绿体蛋白的影响第56-57页
   ·讨论第57-60页
     ·EMS15基因是拟南芥叶绿体的正常发生与发育的必需基因第57-58页
     ·EMS15是PPR 蛋白家族的成员第58页
     ·EMS15突变影响多顺反子中pro-rpoA 的正常裂解第58-60页
参考文献第60-65页
致谢第65页

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