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稻瘟菌产孢相关突变体的筛选及T-DNA侧翼序列分析

1.前言第1-30页
   ·植物病原真菌致病相关基因研究进展第9-16页
   ·稻瘟菌的分子遗传学研究进展第16-28页
     ·稻瘟菌致病性的生物学研究第16-17页
     ·稻瘟菌致病相关基因克隆方法第17-21页
     ·稻瘟菌产孢相关基因研究进展第21-28页
   ·本研究的立题依据和目的意义第28-30页
2 材料和方法第30-42页
   ·供试菌株第30页
   ·供试水稻第30页
   ·培养基第30-31页
   ·生化试剂第31-32页
   ·大规模构建T-DNA插入突变体库第32-34页
     ·转化与筛选第32页
     ·产孢相关突变体的筛选及其生物学性状观察第32-33页
     ·突变体对潮霉素抗性的稳定性检测第33页
     ·突 变体产孢量的测定第33页
     ·突变体致病性的测定第33-34页
   ·稻瘟菌基因组DNA提取及其质量检测第34-36页
     ·稻瘟菌基因组DNA提取溶液的配制第34页
     ·稻瘟菌基因组DNA提取及其检测第34-35页
     ·质粒pBHt2的提取及其检测第35-36页
   ·T-DNA插入的分子检测方法第36-38页
     ·PCR(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测第36页
     ·TAIL-PCR(Thermal Asymmetric Interlaced PCR,)检测第36-38页
   ·DNA片段的回收、克隆第38-41页
     ·DNA片段的回收第38-39页
     ·DNA片段与载体的连接第39页
     ·电击转化感受态细胞的制作第39-40页
     ·电击转化第40页
     ·菌落PCR法鉴定第40-41页
     ·重组子阳性克隆菌的保存第41页
   ·DNA片段的测序第41页
   ·序列分析第41-42页
3.结果与分析第42-56页
   ·T-DNA插入转化子的筛选结果第42页
   ·产孢相关突变体的筛选结果第42-48页
     ·产孢相关突变体与野生型菌株的菌落形态对比观察结果第42-44页
     ·产孢相关突变体与野生型菌株的分生孢子形态对比观察结果第44-46页
     ·产孢相关突变体与野生型菌株的产孢量对比结果第46-47页
     ·产孢相关突变体孢子萌发能力与野生型菌株对比结果第47-48页
     ·产孢相关突变体与野生型菌株的附着胞形成能力对比结果第48页
   ·产孢相关突变体与野生型菌株的有性世代形成能力对比结果第48-49页
   ·突变体对潮霉素抗性的稳定性检测结果第49页
   ·产孢相关突变体致病性测定结果第49页
   ·TAIL-PCR的扩增结果第49-51页
   ·目的片段的回收与克隆第51页
   ·序列分析第51-54页
     ·T-DNA插入位点侧翼序列第52-54页
 终止位置第54-55页
 终止位置第55页
 终止位置第55-56页
4.讨论第56-61页
   ·大规模构建T-DNA插入突变体库的必要性第56-57页
   ·关于遗传转化体系第57页
   ·关于产孢相关突变体的筛选第57-58页
   ·关于T-DNA插入侧翼序列的分析第58-59页
   ·突变体库的保存和意义第59-60页
   ·有待进一步研究的问题第60-61页
5.结论第61-63页
参考文献第63-72页
附录部分:第72-76页
致谢第76页

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