| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-20页 |
| ·刚地弓形虫的发现历史 | 第10页 |
| ·弓形虫的病原学 | 第10-12页 |
| ·猪弓形虫病的流行病学及其危害 | 第12-13页 |
| ·弓形虫生活史 | 第13-14页 |
| ·猪弓形虫病的临床表现 | 第14页 |
| ·弓形虫的毒力及毒素 | 第14-16页 |
| ·速殖子抗原性 | 第16-17页 |
| ·弓形虫分子生物学 | 第17页 |
| ·弓形虫病的诊断方法 | 第17-20页 |
| 第2章 弓形虫PCR诊断方法的建立及初步应用 | 第20-27页 |
| ·研究的目的和意义 | 第20页 |
| ·材料与方法 | 第20-22页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·虫株与菌体 | 第20页 |
| ·相关试剂 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-22页 |
| ·引物设计与合成 | 第21页 |
| ·PCR反应体系及程序 | 第21页 |
| ·PCR产物的鉴定 | 第21页 |
| ·模板的制备 | 第21-22页 |
| ·PCR检测方法的优化 | 第22页 |
| ·PCR检测方法的敏感性测定 | 第22页 |
| ·PCR检测方法的特异性测定 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-26页 |
| ·弓形虫速殖子 | 第22页 |
| ·PCR扩增结果 | 第22-23页 |
| ·不同Mg~(2+)浓度PCR扩增结果 | 第23页 |
| ·不同退火温度的PCR扩增结果 | 第23-24页 |
| ·特异性实验 | 第24-25页 |
| ·灵敏度试验 | 第25页 |
| ·样品检测 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| 第3章 弓形虫病ELISA诊断方法的建立和初步应用 | 第27-48页 |
| ·目的和意义 | 第27页 |
| ·实验材料 | 第27-31页 |
| ·菌种与质粒 | 第27-28页 |
| ·主要药品及试剂 | 第28-29页 |
| ·主要培养基 | 第29页 |
| ·引物 | 第29页 |
| ·酶及试剂盒 | 第29页 |
| ·质粒抽提与鉴定试剂 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第30页 |
| ·Western-blot相关溶液 | 第30页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第30-31页 |
| ·实验用的弓形虫 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-37页 |
| ·弓形虫基因组的提取 | 第31页 |
| ·SAGⅠ基因的PCR扩增 | 第31页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第32-33页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第33页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组表达质粒pGEX-KG的构建 | 第34页 |
| ·SAGⅠ蛋白的表达与纯化 | 第34-35页 |
| ·诱导表达 | 第34页 |
| ·SAGⅠ包涵体表达条件的优化 | 第34页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第34-35页 |
| ·包涵体提纯与复性 | 第35页 |
| ·表达产物的节Western-blot分析 | 第35页 |
| ·ELISA试验条件的确定 | 第35-36页 |
| ·最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定(方正滴定) | 第35-36页 |
| ·ELISA的操作步骤 | 第36页 |
| ·ELISA阴阳界限的确定 | 第36页 |
| ·ELISA方法的特异性试验 | 第36页 |
| ·ELISA方法的重复性试验 | 第36页 |
| ·ELISA的临床应用 | 第36-37页 |
| ·ELISA的临床血清调查 | 第36页 |
| ·IHA的操作步骤 | 第36-37页 |
| ·SAGⅠ-ELISA和IHA间的比较 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-44页 |
| ·弓形虫SAGⅠ基因的PCR扩增 | 第37页 |
| ·SAGⅠ基因与pMD-18T载体的连接及鉴定 | 第37-39页 |
| ·SAGⅠ重组表达载体pGEX-KG的筛选与鉴定 | 第39页 |
| ·pGEX-KG在E.coliBL21中的表达 | 第39-40页 |
| ·Western-blot分析 | 第40页 |
| ·ELISA诊断方法的研制 | 第40-44页 |
| ·SAGⅠ表达条件的优化 | 第40-41页 |
| ·抗原包被浓度与血清最佳稀释度的选择 | 第41-42页 |
| ·ELISA阴阳界限的确定结果 | 第42-43页 |
| ·ELISA特异性试验 | 第43页 |
| ·重复性实验 | 第43-44页 |
| ·ELISA和IHA间的比较 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-48页 |
| ·弓形虫基因组DNA的扩增 | 第44-45页 |
| ·小提质粒 | 第45页 |
| ·弓形虫SAGⅠ基因体外表达 | 第45-46页 |
| ·弓形虫SAGⅠ的抗原性 | 第46页 |
| ·弓形虫病的诊断 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 缩略词 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |