| 摘要 | 第1-11页 |
| 前言 | 第11页 |
| 一．牛病毒性腹泻病毒研究进展 | 第11-16页 |
| 1．1 病原学 | 第11页 |
| 1．2 流行病学 | 第11-12页 |
| 1．3 临床症状 | 第12-13页 |
| 1．3．1 持续性感染(PI) | 第12-13页 |
| 1．3．2 黏膜病与慢性型BVD | 第13页 |
| 1．3．3 急性BVD | 第13页 |
| 1．4 致病机理及病理变化 | 第13页 |
| 1．5 诊断 | 第13-16页 |
| 1．5．1 病毒分离 | 第13-14页 |
| 1．5．2 电镜观察 | 第14页 |
| 1．5．3 血清学诊断 | 第14-15页 |
| 1．5．3．1 微量血清中和试验 | 第14页 |
| 1．5．3．2 免疫琼脂扩散 | 第14页 |
| 1．5．3．3 免疫过氧化物酶技术(IPMA) | 第14页 |
| 1．5．3．4 蛋白A胶体金免疫电镜技术(PAG-IEM) | 第14-15页 |
| 1．5．3．5 免疫荧光技术(IFA) | 第15页 |
| 1．5．3．6 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第15页 |
| 1．5．4 分子生物学诊断方法 | 第15-16页 |
| 1．5．4．1 核酸杂交技术(NAH) | 第15-16页 |
| 1．5．4．2 反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第16页 |
| 1．6 防治 | 第16页 |
| 二．BVDV分子生物学研究进展 | 第16-18页 |
| 2．1 基因组结构 | 第16-17页 |
| 2．1．1 5’-NTR | 第16-17页 |
| 2．1．2 开放阅读框架(ORF) | 第17页 |
| 2．1．3 3’-NTR | 第17页 |
| 2．2 NCP型和CP型BVDV | 第17-18页 |
| 2．3 BVDV的多样性分型 | 第18页 |
| 三．荧光PCR研究进展 | 第18-21页 |
| 1．TaqMan探针实时定量PCR的原理 | 第19页 |
| 2．TaqMan探针实时定量PCR定量理论 | 第19-20页 |
| 3．TaqMan探针 | 第20-21页 |
| 牛病毒性腹泻病毒荧光RT-PCR检测方法的建立和初步应用 | 第21-36页 |
| 1 材料和方法 | 第21-25页 |
| 1．1 材料 | 第21页 |
| 1．1．1 毒株和样品 | 第21页 |
| 1．1．2 细胞 | 第21页 |
| 1．1．3 主要器材 | 第21页 |
| 1．1．4 主要试剂 | 第21页 |
| 1．2 方法 | 第21-25页 |
| 1．2．1 病毒的培养 | 第21-22页 |
| 1．2．2 病毒TCID_(50)的测定 | 第22页 |
| 1．2．3 引物设计 | 第22页 |
| 1．2．4 病毒RNA的抽提 | 第22页 |
| 1．2．5 PCR体系的优化 | 第22-24页 |
| 1．2．5．1 MgCl_2用量的优化 | 第23-24页 |
| 1．2．5．2 Taq酶用量的优化 | 第24页 |
| 1．2．5．3 引物、探针最佳用量优化 | 第24页 |
| 1．2．5．4 退火温度的选择 | 第24页 |
| 1．2．6 敏感性试验 | 第24页 |
| 1．2．7 特异性试验 | 第24页 |
| 1．2．8 重复性试验 | 第24页 |
| 1．2．9 样品检测 | 第24-25页 |
| 2 结果 | 第25-34页 |
| 2．1 病毒培养 | 第25页 |
| 2．2 TCID_(50)测定结果 | 第25-26页 |
| 2．3 MgCl_2用量优化结果 | 第26页 |
| 2．4 Taq酶用量优化结果 | 第26-27页 |
| 2．5 引物、探针用量最佳比例优化结果 | 第27页 |
| 2．6 退火温度的选择 | 第27-29页 |
| 2．7 荧光RT-PCR反应灵敏性试验 | 第29-30页 |
| 2．8 荧光RT-PCR特异性试验 | 第30-31页 |
| 2．9 荧光RT-PCR方法重复性试验 | 第31页 |
| 2．10 样品检测结果 | 第31-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 3．1 关于荧光RT-PCR | 第34-35页 |
| 3．2 关于荧光RT-PCR的引物 | 第35页 |
| 3．3 关于荧光RT-PCR检测技术中模板RNA的提取与保存 | 第35页 |
| 3．4 关于BVDV | 第35-36页 |
| 结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-43页 |
| 致谢 | 第43页 |
