| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-24页 |
| 1. 神经营养因子的分子生物学特性 | 第8-12页 |
| ·神经营养因子定义与分类 | 第8-9页 |
| ·神经营养因子的理化性质 | 第9-11页 |
| ·神经营养因子受体 | 第11-12页 |
| 2. 神经营养因子参与的信号转导 | 第12-15页 |
| ·P75NTR介导的信号转导 | 第12-13页 |
| ·Trk酪氨酸激酶介导的信号转导 | 第13-14页 |
| ·P75NTR与Trk的相互作用 | 第14-15页 |
| 3. 神经营养因子的分泌机理 | 第15-19页 |
| ·神经营养因子的合成与加工成熟 | 第15-16页 |
| ·细胞内神经营养因子的运输和定位 | 第16-18页 |
| ·神经营养因子的分泌机制 | 第18-19页 |
| 4. 神经营养因子与疾病 | 第19-21页 |
| ·神经营养因子与神经系统疾病 | 第20-21页 |
| ·神经营养因子与非神经系统疾病 | 第21页 |
| 5. 神经营养因子与生物制药 | 第21-23页 |
| ·生物制药原理和步骤 | 第21-22页 |
| ·神经营养因子作为靶标的生物制药进展 | 第22-23页 |
| 6. 本研究的目的意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-35页 |
| 1. 材料 | 第24-27页 |
| ·人类淋巴细胞RNA | 第24页 |
| ·质粒及菌株 | 第24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·酶及试剂盒 | 第25页 |
| ·抗生素 | 第25页 |
| ·碱裂解法提取质粒相关溶液 | 第25-26页 |
| ·SDS-PAGE和Western blotting相关溶液 | 第26页 |
| ·ELISA相关溶液 | 第26-27页 |
| ·其它 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27页 |
| 2. 方法 | 第27-35页 |
| ·人外周血淋巴细胞分离步骤 | 第27页 |
| ·淋巴细胞总RNA的提取 | 第27页 |
| ·RT-PCR | 第27-28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳产物的回收 | 第28页 |
| ·BDNF基因克隆到pMD18-T | 第28-31页 |
| ·BDNF基因克隆到PET32a并转化大肠杆菌 | 第31页 |
| ·BDNF基因克隆到pPIC9K | 第31-32页 |
| ·重组质粒导入酵母细胞GS115 | 第32-33页 |
| ·酵母菌的诱导 | 第33-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-48页 |
| 1. BDNF基因的扩增 | 第35-36页 |
| ·cDNA的合成 | 第35页 |
| ·RT-PCR | 第35-36页 |
| 2. 原核表达载体pET32-BDNF的构建、鉴定与表达 | 第36-40页 |
| ·RT-PCR产物的克隆和鉴定 | 第36-38页 |
| ·BDNF克隆到表达载体pET32a | 第38页 |
| ·pET32-BDNF重组子的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·BDNF成熟基因片段在大肠杆菌的表达 | 第39-40页 |
| ·Western印迹分析 | 第40页 |
| 3. 真核表达载体pPIC9K-BDNF的构建和鉴定、表达和检测 | 第40-48页 |
| ·BDNF基因的克隆 | 第40-41页 |
| ·T-BDNF克隆和鉴定 | 第41-42页 |
| ·BDNF克隆到真核表达载体pPIC9K | 第42页 |
| ·BDNF与pPIC9K重组子的鉴定 | 第42-43页 |
| ·pPIC9K-BDNF质粒的构建过程 | 第43-45页 |
| ·pPIC9K-BDNF酵母重组子的筛选和检测 | 第45-46页 |
| ·酵母重组子在酵母细胞GS115中的诱导表达 | 第46页 |
| ·ELISA | 第46-48页 |
| 第四章 讨论 | 第48-53页 |
| 1. 人类神经营养因子BDNF基因的克隆 | 第48-49页 |
| 2. 表达载体的选择与应用 | 第49-51页 |
| 3. 原核表达载体与真核表达载体的比较研究 | 第51-53页 |
| 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
