| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1. 前言 | 第6-18页 |
| ·植酸酶的种类、来源 | 第6页 |
| ·植酸酶的种类 | 第6页 |
| ·植酸酶的来源 | 第6页 |
| ·植酸酶的研究历史与现状 | 第6-8页 |
| ·植酸酶的生物学性质 | 第8-9页 |
| ·植酸酶的特征常数 | 第8页 |
| ·植酸酶的作用机理 | 第8-9页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第9-10页 |
| ·植酸酶的活力单位 | 第9页 |
| ·植酸酶活性的测定方法 | 第9-10页 |
| ·植酸酶的分子生物学及基因工程研究进展 | 第10-13页 |
| ·植酸酶的基因 | 第10-12页 |
| ·植酸酶的基因工程 | 第12-13页 |
| ·植酸酶的热稳定性 | 第13页 |
| ·巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统简介 | 第13-17页 |
| ·Pichia pastoris的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的优点 | 第14页 |
| ·表达系统简介 | 第14-17页 |
| ·应用前景 | 第17页 |
| ·本研究的目的 | 第17-18页 |
| 2. 材料与方法 | 第18-28页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·药品与酶 | 第18页 |
| ·培养基与贮备液 | 第18-19页 |
| ·试剂与缓冲溶液 | 第19-21页 |
| ·供试抗生素 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-28页 |
| ·烟熏曲霉CCTCC AF 93024植酸酶phyA基因的克隆 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的抽提及纯化 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·凝胶回收目的DNA | 第23页 |
| ·植酸酶phyA基因表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌质粒的快速检测 | 第24页 |
| ·正向插入阳性转化子的验证与phyA基因序列测定 | 第24页 |
| ·毕赤酵母细胞的转化 | 第24-25页 |
| ·表达菌株植酸酶酶活性的平板检测 | 第25页 |
| ·表达菌株的PCR检测确证 | 第25页 |
| ·植酸酶基因(phyA)在毕赤酵母GS115中的诱导表达 | 第25-26页 |
| ·植酸酶酶活性的测定 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备及发酵上清液的蛋白质电泳 | 第26-27页 |
| ·重组酵母植酸酶性质的研究 | 第27-28页 |
| 3. 结果与分析 | 第28-40页 |
| ·烟熏曲霉CCTCC AF 93024植酸酶phyA基因的克隆 | 第28-32页 |
| ·烟熏曲霉CCTCC AF 93024总DNA的提取 | 第28页 |
| ·烟熏曲霉CCFCC AF 93024中phyA的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·植酸酶phyA基因表达载体的构建 | 第29-32页 |
| ·酵母的电击转化和重组子的筛选 | 第32-35页 |
| ·毕赤酵母感受态的制备 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pPIC9K-phyAF8的线性化 | 第33页 |
| ·重组子的筛选 | 第33-34页 |
| ·重组酵母的植酸酶活性平板验证 | 第34-35页 |
| ·重组酵母总DNA中phyA的PCR检测 | 第35页 |
| ·重组酵母植酸酶活性测定 | 第35-37页 |
| ·磷酸标准曲线的制作 | 第35-36页 |
| ·重组酵母的筛选 | 第36页 |
| ·重组酵母P. pastoris PHYA10中植酸酶的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·重组酵母发酵液的SDS-PAGE电泳 | 第37-38页 |
| ·重组酵母植酸酶性质 | 第38-40页 |
| 4. 小结与讨论 | 第40-42页 |
| ·小结 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·phyA基因的克隆 | 第40页 |
| ·表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·植酸酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 致谢 | 第45页 |
