大熊猫犬冠状病毒S基因的扩增、克隆和序列分析
| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Absract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-17页 |
| 正文 | 第17-40页 |
| 1 材料与方法 | 第17-23页 |
| ·材料 | 第17页 |
| ·病毒 | 第17页 |
| ·质粒和菌株 | 第17页 |
| ·主要工具酶及其它试剂 | 第17页 |
| ·引物 | 第17页 |
| ·方法 | 第17-23页 |
| ·病毒传代与培养 | 第17页 |
| ·引物设计 | 第17-18页 |
| ·病毒细胞培养物细胞总RNA提取 | 第18页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第18-19页 |
| ·系统组成 | 第18-19页 |
| ·反转录 | 第19页 |
| ·PCR扩增 | 第19-21页 |
| ·体系组成 | 第19-20页 |
| ·片段1(368bp)的PCR扩增 | 第20页 |
| ·片段2(792bp)的PCR扩增 | 第20页 |
| ·片段3(737bp)的套式PCR扩增 | 第20页 |
| ·片段4(1178bp)的套式PCR扩增 | 第20页 |
| ·片段5(985bp)的套式PCR扩增 | 第20-21页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第21-23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第21页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第21页 |
| ·连接与转化 | 第21-22页 |
| ·质粒的小量制备 | 第22-23页 |
| ·重组质粒PCR的鉴定 | 第23页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第23页 |
| ·基因序列测定 | 第23页 |
| ·基因序列分析 | 第23页 |
| ·核苷酸序列同源性分析 | 第23页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第23页 |
| 2 结果 | 第23-38页 |
| ·PCR扩增结果 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的PCR和酶切鉴定结果 | 第24-26页 |
| ·序列测定及序列分析结果 | 第26-38页 |
| ·DXMV的S基因序列及推导的氨基酸序列 | 第26-35页 |
| ·核苷酸序列多重比较结果 | 第35页 |
| ·氨基酸序列多重比较结果 | 第35-38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| ·关于病毒的RNA | 第38页 |
| ·关于套式PCR(n-PCR) | 第38-39页 |
| ·关于基因的克隆 | 第39页 |
| ·关于序列分析 | 第39-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 附图1 | 第45-51页 |
| 附图2 | 第51-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录一 | 第67-68页 |
| 附录二 | 第68-69页 |
| 附录三 | 第69-70页 |
| 附录四 | 第70-71页 |
| 附录五 | 第71-72页 |
| 附录六 | 第72-73页 |
| 附录七 | 第73页 |
