蜡蚧轮枝菌几丁质酶基因的克隆及高毒力重组菌株的获得
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 虫生真菌感染寄主的致病机理 | 第12-16页 |
| ·体表附着阶段 | 第13页 |
| ·表皮吸附 | 第13页 |
| ·分生孢子的萌发 | 第13页 |
| ·体壁穿透阶段 | 第13-15页 |
| ·附着胞的形成 | 第13-14页 |
| ·穿透体壁 | 第14-15页 |
| ·体内定殖阶段 | 第15-16页 |
| ·寄主免疫反应抵抗 | 第15页 |
| ·毒素分泌 | 第15-16页 |
| ·体内生长及能量代谢 | 第16页 |
| 2 基因工程技术改良虫生真菌毒力的研究 | 第16-17页 |
| 3 几丁质酶的研究现状 | 第17-19页 |
| 4 蜡蚧轮枝菌的研究进展 | 第19-21页 |
| ·蜡蚧轮枝菌的形态 | 第19页 |
| ·蜡蚧轮枝菌的分类地位 | 第19-20页 |
| ·蜡蚧轮枝菌生物防治应用研究 | 第20-21页 |
| ·防治温室粉虱 | 第20页 |
| ·防治蚜虫 | 第20页 |
| ·防治蚧类 | 第20页 |
| ·防治其他害虫 | 第20-21页 |
| ·防治植物病害 | 第21页 |
| ·蜡蚧轮枝菌几丁质酶研究进展 | 第21页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 蜡蚧轮枝菌几丁质酶基因的克隆及分析 | 第22-46页 |
| 1 实验材料与方法 | 第22-32页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·供试菌株 | 第22页 |
| ·载体质粒 | 第22页 |
| ·常用培养基 | 第22页 |
| ·主要化学试剂 | 第22-23页 |
| ·主要的实验仪器及设备 | 第23-24页 |
| ·常用贮存液和缓冲液 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-32页 |
| ·蜡蚧轮枝菌总 DNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·蜡蚧轮枝菌总 RNA 的提取 | 第25页 |
| ·几丁质酶基因的克隆 | 第25-29页 |
| ·设计简并引物 | 第25页 |
| ·合成第一链 cDNA | 第25页 |
| ·cDNA 为模板合成几丁质酶部分片段 | 第25-26页 |
| ·RACE PCR | 第26-28页 |
| ·开放阅读框（ORF）的推导及 PCR 扩增 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分析 | 第29页 |
| ·PCR 产物的胶回收 | 第29页 |
| ·载体质粒的构建 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌超级感受态的制备 | 第30页 |
| ·转化和筛选 | 第30页 |
| ·质粒提取 | 第30页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒 | 第30-31页 |
| ·几丁质酶基因序列及氨基酸序列分析 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-44页 |
| ·蜡蚧轮枝菌总 RNA 和总 DNA 的提取 | 第32页 |
| ·几丁质酶基因的克隆获得 | 第32-39页 |
| ·几丁质酶基因序列的分析 | 第39-44页 |
| ·核苷酸序列同源性分析 | 第39-40页 |
| ·推导的蛋白质基本性质分析 | 第40页 |
| ·推导的蛋白质疏水性分析 | 第40-42页 |
| ·蛋白质三级结构预测 | 第42-43页 |
| ·系统发育分析 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44页 |
| 4 结论 | 第44-46页 |
| 第三章 高毒力菌株的获得及其几丁质酶活变化 | 第46-60页 |
| 1 实验材料与方法 | 第46-50页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·供试菌株 | 第46页 |
| ·表达载体 | 第46页 |
| ·常用培养基 | 第46页 |
| ·主要化学试剂 | 第46页 |
| ·主要的实验仪器及设备 | 第46-47页 |
| ·常用贮存液和缓冲液 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-50页 |
| ·确定草丁膦抗性筛选浓度 | 第47页 |
| ·感受态芽生孢子的制备 | 第47-48页 |
| ·芽生孢子转化过程 | 第48页 |
| ·重组克隆的 PCR 快速检测 | 第48页 |
| ·转化子稳定性测试 | 第48页 |
| ·胶体几丁质的制备 | 第48-49页 |
| ·NAG 标准曲线的绘制 | 第49页 |
| ·几丁质酶活性的测定 | 第49-50页 |
| ·重组菌株的毒力测定 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-58页 |
| ·芽生孢子制备 | 第50-51页 |
| ·芽生孢子的转化 | 第51-52页 |
| ·PCR 快速检测 | 第52页 |
| ·转化子的稳定性检测 | 第52页 |
| ·N-乙酰葡糖胺（NAG）标准曲线的制作 | 第52-53页 |
| ·转化子几丁质酶的活力测定 | 第53页 |
| ·重组菌株的毒力 probit 分析 | 第53-58页 |
| 3 讨论 | 第58页 |
| 4 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 英文缩写中文对照表 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
