| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述:高等植物跨膜离子转运蛋白与其耐盐性研究 | 第12-30页 |
| 一.K~+、Na~+转运蛋白与植物的耐盐性 | 第13-23页 |
| 1.离子通道 | 第13-20页 |
| ·内向整流K~+通道 | 第14-18页 |
| ·外向整流K~+通道 | 第18-19页 |
| ·电压不依赖型阳离子通道或非选择性阳离子通道 | 第19-20页 |
| 2.离子转运载体 | 第20-23页 |
| ·高亲和性K~+载体 | 第20-23页 |
| ·低亲和性离子转运蛋白 | 第23页 |
| 二.植物Na~+/H~+逆向转运蛋白与耐盐性的关系 | 第23-27页 |
| 1.植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白 | 第24-25页 |
| 2.植物质膜Na~+/H~+逆向转运蛋白 | 第25-27页 |
| 三.植物H~+-ATPase与耐盐性的关系 | 第27-28页 |
| 四.结语 | 第28-30页 |
| 第二部分 研究工作 | 第30-75页 |
| 前言 | 第30-31页 |
| 一.材料与方法 | 第31-53页 |
| 1.LCT1基因的染色体定位 | 第31-34页 |
| ·材料与试剂 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-34页 |
| ·CTAB法提取中国春缺体-四体及双端体小麦叶片基因组DNA | 第32-33页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·PCR | 第33-34页 |
| ·电泳 | 第34页 |
| 2.克隆LCT1基因启动子 | 第34-41页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-41页 |
| ·CTAB法提取中国春小麦叶片基因组DNA | 第34-35页 |
| ·设计引物 | 第35页 |
| ·TAIL-PCR方法与步骤 | 第35-38页 |
| ·电泳检测 | 第38页 |
| ·切胶回收 | 第38-39页 |
| ·回收的目的片段与T载体连接 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态制备及转化 | 第39-40页 |
| ·菌体PCR验证 | 第40-41页 |
| ·送菌测序 | 第41页 |
| 3.LCT1基因及LCT1-2序列的酵母突变体转化与功能验证实验 | 第41-47页 |
| ·材料、试剂与培养基 | 第41-43页 |
| ·实验方法 | 第43-47页 |
| ·提取重组质粒的大肠杆菌质粒 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的验证 | 第44-45页 |
| ·酵母感受态制备及转化 | 第45-46页 |
| ·酵母菌转化重组子的PCR鉴定 | 第46页 |
| ·转化重组子的NaCl培养基上的生长 | 第46-47页 |
| 4.LCT1基因及LCT1-2序列转化拟南芥 | 第47-53页 |
| ·材料、试剂与培养基 | 第47-49页 |
| ·实验方法 | 第49-53页 |
| ·提取重组质粒的大肠杆菌质粒 | 第49页 |
| ·重组质粒的验证 | 第49-50页 |
| ·农杆菌AGL1感受态的制备 | 第50页 |
| ·冻融法转化根癌农杆菌AGL1 | 第50-51页 |
| ·农杆菌转化子的验证 | 第51页 |
| ·拟南芥转化 | 第51-52页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第52页 |
| ·移栽转基因植株及收获种子 | 第52-53页 |
| 二.结果与分析 | 第53-70页 |
| 1.LCT1基因的染色体定位 | 第53-56页 |
| ·扩增中国春缺体-四体系1号及2号染色体的缺体-四体小麦 | 第53页 |
| ·扩增中国春缺体-四体系3号、4号及5号染色体的缺体-四体小麦 | 第53-54页 |
| ·扩增中国春缺体-四体系6号及7号染色体的缺体-四体系小麦 | 第54-55页 |
| ·重新扩增中国春小麦1B1A及1B1D染色体缺体-四体系小麦 | 第55页 |
| ·扩增中国春1BS及1BL染色体双端体系小麦 | 第55-56页 |
| 2.LCT1基因启动子的克隆 | 第56-62页 |
| ·TAIL-PCR结果 | 第56页 |
| ·获得片段的比对结果 | 第56-57页 |
| ·应用PlantCARE软件分析核心启动子的结果 | 第57-62页 |
| 3.LCT1基因及LCT1-2序列在酵母突变体中的表达 | 第62-66页 |
| ·酵母表达载体的验证 | 第62页 |
| ·酵母转化重组子鉴定 | 第62-63页 |
| ·酵母菌转化子在含NaCl培养基上的生长情况实验 | 第63-66页 |
| ·不同转化子在同一盐浓度下的生长状况 | 第63-64页 |
| ·同一转化子在不同盐浓度下的生长状况分析 | 第64-66页 |
| ·综合分析 | 第66页 |
| 4.LCT1基因及LCT1-2序列转化拟南芥 | 第66-70页 |
| ·基因过表达载体的验证 | 第66-67页 |
| ·重组子中目的基因片段的PCR验证 | 第66-67页 |
| ·重组子中目的基因片段的酶切验证 | 第67页 |
| ·转化农杆菌后重组子的验证 | 第67-68页 |
| ·拟南芥转化植株的筛选 | 第68-70页 |
| 三.讨论 | 第70-74页 |
| 1.小麦LCT1基因的定位 | 第70-71页 |
| 2.小麦LCT1基因启动子的克隆 | 第71-72页 |
| 3.LCT1基因的功能分析 | 第72-74页 |
| 四.工作总结与展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第80页 |
