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STLV-1/BV重组蛋白ELISA诊断试剂盒的研发及液相芯片诊断方法的建立

摘要第1-5页
Abstract第5-10页
1 引言第10-33页
   ·STLV-1 的流行病学和分子病毒学第10-19页
     ·STLV-1 病毒粒子的形态及生物特性第10-12页
     ·PTLV-1 的进化、流行病学及传播途径第12-19页
   ·BV(HESPESVIRUS B)的病毒学和流行病学第19-25页
     ·B 病毒的一般特征第19-21页
     ·B 病毒的分子生物学特性第21-22页
     ·B 病毒病的病理学和发病机理第22-24页
     ·B 病毒感染的诊断第24-25页
   ·体液免疫及免疫应答第25-27页
     ·B 细胞介导的体液免疫应答第25页
     ·体液免疫的特征、方式第25-27页
   ·动物疫病实验室常用的诊断方法及SPF 动物的实验意义第27-31页
     ·PCR 在病原学检测方面的应用第27-28页
     ·酶联免疫吸附试验(ELISA)在抗原抗体检测方面的应用第28页
     ·免疫印迹法(Western blotting)第28-29页
     ·液相芯片技术(Luminex)第29-31页
     ·SPF 动物对于实验研究的重大意义第31页
   ·本实验的目的和意义第31-33页
2 BV、STLV-1 抗原基因的克隆及融合HIS-TAG 蛋白的原核构建第33-46页
   ·实验材料第33页
     ·主要试剂第33页
     ·主要仪器第33页
     ·质粒与菌种第33页
   ·实验方法第33-37页
     ·抗原基因的克隆及其表达载体构建的技术路线第33-34页
     ·STLV-1、BV 抗原基因片段的克隆与序列测定第34-37页
   ·实验结果第37-44页
     ·化学合成目的片段的结果第37-39页
     ·酶切电泳及测序结果第39-44页
   ·讨论第44-46页
3 重组蛋白在大肠杆菌中表达与纯化第46-70页
   ·实验材料第46-47页
     ·主要试剂第46页
     ·主要仪器第46页
     ·质粒第46-47页
     ·表达宿主第47页
   ·实验方法第47-65页
     ·表达质粒转化表达宿主第47页
     ·重组蛋白的小量表达及SDS-PAGE 分析第47-49页
     ·重组蛋白的大量表达——发酵第49-52页
     ·重组蛋白的大量纯化第52-63页
     ·BV 重组蛋白的透析第63页
     ·透析产物的超滤及浓缩第63页
     ·表达、纯化的重组蛋白Western Blot 分析第63-64页
     ·考马斯亮蓝法测定蛋白浓度第64-65页
   ·实验结果第65-67页
     ·STLV-1、BV 重组蛋白纯化后SDS-PAGE 检测第65-66页
     ·蛋白免疫印迹(Western Blot)第66-67页
     ·浓度的测定第67页
   ·讨论第67-70页
4 重组蛋白检测恒河猴血清STLV-1、BV 抗体第70-90页
   ·实验材料第70页
     ·实验试剂第70页
     ·实验仪器第70页
   ·实验方法第70-75页
     ·血清的收集第70-71页
     ·酶联免疫吸附实验(ELISA)第71-72页
     ·发光底物显色Western Blot第72页
     ·液相芯片(荧光微球技术—LUMINEX)第72-74页
     ·商品化试剂盒检测方法第74-75页
   ·实验结果第75-84页
     ·重组抗原与商品化ELISA 诊断试剂盒检测结果第75-76页
     ·Western Blot 结果第76-82页
     ·LUMINEX 结果第82-84页
   ·讨论第84-90页
     ·重组蛋白用于检测STLV-1 抗体与商品化试剂盒对比的讨论第84-86页
     ·重组蛋白用于检测BV 抗体与商品化试剂盒对比第86-87页
     ·液相芯片方法的建立对猴群净化的意义第87-90页
5 结论第90-91页
致谢第91-92页
参考文献第92-105页
附录1第105-149页
附录2第149-153页
附录3第153-156页
作者简介第156页

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