| 缩略语一览表 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-21页 |
| 1 实验材料 | 第21-28页 |
| ·主要菌株 | 第21页 |
| ·质粒 | 第21页 |
| ·主要培养基 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第21页 |
| ·E.faecium培养基 | 第21页 |
| ·斜面培养基 | 第21-22页 |
| ·发酵培养基 | 第22页 |
| ·引物 | 第22页 |
| ·工具酶 | 第22-23页 |
| ·试剂盒 | 第23页 |
| ·分离介质 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要溶液 | 第24-26页 |
| ·E.faecium总DNA提取缓冲液 | 第24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第24页 |
| ·大肠杆菌DH5α/大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞制备液 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE电泳有关缓冲液 | 第24-25页 |
| ·蛋白纯化缓冲液 | 第25页 |
| ·Western blotting试剂与缓冲液 | 第25页 |
| ·酶活性检测缓冲液 | 第25-26页 |
| ·Actinonin贮存液 | 第26页 |
| ·其它材料 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-50页 |
| ·PDF的表达 | 第28-36页 |
| ·E.faecium总DNA的提取分离 | 第28页 |
| ·PCR扩增目的DNA片段 | 第28-29页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| ·回收目的DNA片断 | 第29页 |
| ·PCR产物末端加A反应 | 第29-30页 |
| ·末端加A的PCR产物与pGEM-T Easy Vector的连接 | 第30页 |
| ·CaCl_2法制备DH5α感受态细胞(BL21(DE3)感受态细胞同样制备) | 第30-31页 |
| ·DNA连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第31-32页 |
| ·PCR法初步鉴定目的基因是否连接到表达载体中 | 第32页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第32-33页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·蛋白表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第35-36页 |
| ·PDF的纯化和分析 | 第36-39页 |
| ·金属鏊合层析纯化原理 | 第36页 |
| ·样品的预处理 | 第36-37页 |
| ·使用AKTA prime系统纯化蛋白 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第37-38页 |
| ·超滤 | 第38页 |
| ·蛋白浓度检测 | 第38页 |
| ·酶的贮存 | 第38页 |
| ·Western blotting分析 | 第38-39页 |
| ·PDF的活性分析 | 第39页 |
| ·酶活性分析原理 | 第39页 |
| ·酶活性的初步检测 | 第39页 |
| ·阳性对照Actinonin对酶的作用 | 第39页 |
| ·筛选模型的恢复 | 第39-40页 |
| ·确定最佳底物浓度 | 第39页 |
| ·反应步骤 | 第39-40页 |
| ·酶抑制率计算 | 第40页 |
| ·药物筛选 | 第40-44页 |
| ·发酵液样品的筛选 | 第40-41页 |
| ·化合物的虚拟筛选 | 第41-44页 |
| ·I03A-00723菌株的小量发酵和初提 | 第44-45页 |
| ·斜面培养基的确定 | 第44页 |
| ·发酵时间及活性部位的确定 | 第44-45页 |
| ·热稳定性检测 | 第45页 |
| ·提取条件(pH值)的确定 | 第45页 |
| ·I03A-00723菌株的大量发酵和分离纯化 | 第45-46页 |
| ·化合物的鉴定和结构解析 | 第46-47页 |
| ·化合物的性状观察 | 第46页 |
| ·化合物的纯度分析 | 第46-47页 |
| ·化合物的紫外吸收光谱 | 第47页 |
| ·化合物的质谱分析 | 第47页 |
| ·化合物的核磁共振谱分析 | 第47页 |
| ·化合物的活性测定 | 第47-49页 |
| ·化合物的抑酶活性测定 | 第47页 |
| ·化合物的抗菌活性测定 | 第47-49页 |
| ·分离纯化的活性化合物与PDF的分子对接 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-88页 |
| ·PDF的表达 | 第50-53页 |
| ·E.faecium总DAN的提取分离 | 第50页 |
| ·PCR扩增结果 | 第50-51页 |
| ·PCR初步检测 | 第51页 |
| ·双酶切检测 | 第51-52页 |
| ·序列测定 | 第52-53页 |
| ·PDF的纯化和鉴定 | 第53-54页 |
| ·AKTA prime系统纯化目的蛋白 | 第53页 |
| ·SDS-PAGE检测诱导及分离纯化的目的蛋白 | 第53-54页 |
| ·Western blotting分析 | 第54页 |
| ·PDF的活性分析 | 第54-55页 |
| ·酶活性的初步检测 | 第54-55页 |
| ·阳性对照Actinonin的抑酶活性 | 第55页 |
| ·最佳底物浓度分析 | 第55-56页 |
| ·药物筛选 | 第56-62页 |
| ·发酵液样品的筛选 | 第56-59页 |
| ·化合物的虚拟筛选 | 第59-62页 |
| ·I03A-00723菌株的小量发酵和初提 | 第62-64页 |
| ·斜面培养基的确定 | 第62页 |
| ·发酵时间及活性部位的确定 | 第62-63页 |
| ·热稳定性检测 | 第63页 |
| ·提取条件(pH值)的确定 | 第63-64页 |
| ·I03A-00723菌株的大量发酵和分离纯化 | 第64-66页 |
| ·化合物的理化性质分析和结构鉴定 | 第66-82页 |
| ·化合物95-1的理化性质分析和结构鉴定 | 第66-68页 |
| ·化合物95-1-h1的理化性质分析和结构鉴定 | 第68-69页 |
| ·化合物95-2的理化性质分析和结构鉴定 | 第69-72页 |
| ·化合物95-3的理化性质分析和纯度分析 | 第72-73页 |
| ·化合物135的理化性质分析和结构鉴定 | 第73-76页 |
| ·化合物205-1的理化性质分析和结构鉴定 | 第76-79页 |
| ·化合物205-2的理化性质分析和结构鉴定 | 第79-80页 |
| ·化合物205-3的理化性质分析和结构鉴定 | 第80-82页 |
| ·化合物的活性检测 | 第82-85页 |
| ·化合物的抑酶活性检测 | 第82页 |
| ·化合物的抗菌活性检测 | 第82-85页 |
| ·分离纯化的活性化合物与PDF的分子对接 | 第85-88页 |
| 4 讨论 | 第88-92页 |
| 5 结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-102页 |
| 文献综述 | 第102-124页 |
| 附录 | 第124-181页 |
| 致谢 | 第181页 |
