| 致谢 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-30页 |
| ·Lipin1 基因国内外研究现状及分析 | 第13-20页 |
| ·Lipin1 基因的两种剪接产物具有不同但互补的功能 | 第13页 |
| ·Lipin1 是一种编码Mg~(2+)依赖性的磷脂酸(PA)磷酸化酶的基因 | 第13页 |
| ·Lipin1 基因的通路及与脂肪代谢相关基因的关系 | 第13-15页 |
| ·Lipin1 基因对血清中总胆固醇和甘油三酯含量的影响及其机制 | 第15页 |
| ·Lipin1 基因变异及其效应 | 第15-16页 |
| ·Lipin1 基因对小鼠脂肪沉积的影响 | 第16页 |
| ·Lipin1 基因表达异常不影响动物采食量但引起饲料转化效率的改变 | 第16-17页 |
| ·Lipin1 基因表达具有强烈的影响脂肪沉积的效应 | 第17-18页 |
| ·脂肪沉积受多基因控制 | 第18页 |
| ·鸡体脂肪的代谢及肝脏代谢的功能 | 第18-19页 |
| ·鸡脂肪候选基因Lipin1 的初步分析 | 第19-20页 |
| ·真核基因可变剪接的调控机制 | 第20-23页 |
| ·可变剪接的概念 | 第20页 |
| ·可变剪接的类型 | 第20页 |
| ·可变剪接的调控 | 第20-23页 |
| ·荧光定量PCR 技术研究进展 | 第23-28页 |
| ·荧光定量PCR 定量原理 | 第24页 |
| ·常用的荧光定量PCR 仪 | 第24-25页 |
| ·PE 公司生产的Applied Biosystem 系列 | 第24页 |
| ·Roehe 公司生产的Lightcycler 热循环仪 | 第24-25页 |
| ·Bio-rad 公司生产的iCycler iQ | 第25页 |
| ·Strategene 公司的MX4000 MultiPlex | 第25页 |
| ·CePheid 公司的Smart Cycler System | 第25页 |
| ·Corbert Researeh 公司的Rotor-Gene | 第25页 |
| ·荧光探针的种类及其作用原理 | 第25-26页 |
| ·SYBR GreenⅠ | 第25-26页 |
| ·水解探针或TaqMan 探针 | 第26页 |
| ·杂交探针 | 第26页 |
| ·分子信标(molecular beacon) | 第26页 |
| ·Scorpions | 第26页 |
| ·荧光定最PCR 技术的优点 | 第26-27页 |
| ·荧光定量PCR 技术的应用 | 第27-28页 |
| ·荧光定量PCR 在病原微生物检测上的应用 | 第27页 |
| ·荧光定量PCR 在细胞因子基因表达定量检测上的应用 | 第27-28页 |
| ·荧光定量PCR 在肿瘤研究中的应用 | 第28页 |
| ·荧光定量PCR 在基因突变分析上的应用 | 第28页 |
| ·研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 2 引言 | 第30-31页 |
| 3 鸡Lipin1 基因在不同组织中的表达差异和可变剪接形式研究 | 第31-49页 |
| ·试验材料 | 第31-32页 |
| ·试验动物 | 第31页 |
| ·主要试剂以及配制 | 第31页 |
| ·TE 缓冲液 | 第31页 |
| ·5×TBE 缓冲液 | 第31页 |
| ·0.1% DEPC(焦碳酸二乙酯)溶液 | 第31页 |
| ·无RNA 酶75%酒精 | 第31页 |
| ·1%、1.2%、2%琼脂糖 | 第31页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·试验方法 | 第32-35页 |
| ·PCR 引物设计与合成 | 第32页 |
| ·提取各个组织中的总RNA | 第32页 |
| ·RNA 的纯化 | 第32-33页 |
| ·RNA 浓度的测定 | 第33页 |
| ·反转录反应 | 第33页 |
| ·PCR 反应 | 第33-34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第34页 |
| ·胶回收和测序 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-45页 |
| ·各组织总RNA 的提取 | 第35页 |
| ·用持家基因β-actin 引物进行RT-PCR 检测各组织cDNA 的质量 | 第35-36页 |
| ·引物LP1 扩增产物及其组织特异性研究 | 第36-40页 |
| ·RT-PCR 电泳结果 | 第36-37页 |
| ·胶回收产物检测 | 第37页 |
| ·测序结果分析 | 第37-39页 |
| ·可变剪接形式鸡Lipin1-β组织特异性分析 | 第39-40页 |
| ·引物LP2 扩增产物及其组织特异性研究 | 第40-42页 |
| ·RT-PCR 电泳结果 | 第40页 |
| ·胶回收产物检测 | 第40-41页 |
| ·测序结果分析 | 第41-42页 |
| ·可变剪接形式鸡Lipin1-γ组织特异性分析 | 第42页 |
| ·引物LP3 扩增产物及其组织特异性研究 | 第42-45页 |
| ·RT-PCR 的电泳结果 | 第42-43页 |
| ·胶回收产物检测 | 第43页 |
| ·测序结果分析 | 第43-44页 |
| ·利用半定量PCR 检测鸡总Lipin1 基因在不同组织中的表达 | 第44-45页 |
| ·鸡总Lipin1 基因在丝毛乌骨鸡不同组织中表达差异分析 | 第45页 |
| ·结论与讨论 | 第45-49页 |
| ·鸡Lipin1 基因的研究现状 | 第45页 |
| ·鸡Lipin1 基因可变剪接形式分析及与其它物种的比较 | 第45-47页 |
| ·半定量PCR | 第47页 |
| ·鸡总Lipin1基因在不同组织中的表达及与其它物种的比较 | 第47-49页 |
| 4 利用荧光定量PCR 检测鸡Lipin1 基因在不同能量水平饲粮间的表达差异研究 | 第49-70页 |
| ·试验材料 | 第49-50页 |
| ·试验动物 | 第49页 |
| ·主要试剂以及配制 | 第49-50页 |
| ·TE 缓冲液 | 第50页 |
| ·5×TBE 缓冲液 | 第50页 |
| ·0.1% DEPC(焦碳酸二乙酯)溶液 | 第50页 |
| ·无RNA 酶75%酒精 | 第50页 |
| ·1%、1.2%、2%琼脂糖 | 第50页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-54页 |
| ·PCR 引物设计与合成 | 第50-51页 |
| ·提取组织中的总RNA | 第51页 |
| ·RNA 的纯化 | 第51-52页 |
| ·RNA 浓度的测定 | 第52页 |
| ·反转录反应 | 第52页 |
| ·荧光定量PCR 反应 | 第52-54页 |
| ·荧光定量PCR 试验设计 | 第52-53页 |
| ·荧光定量PCR 反应操作步骤 | 第53页 |
| ·荧光定量PCR 反应结果分析 | 第53-54页 |
| ·相对定量PCR 方法 | 第54页 |
| ·统计学分析 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-66页 |
| ·能量限制组与自由采食组中具有显著差异的表型指标及生理生化指标 | 第54-55页 |
| ·肝脏和脂肪组织总RNA 的提取 | 第55页 |
| ·用持家基因β-actin 引物进行RT-PCR 检测各组织cDNA 的质量 | 第55-56页 |
| ·荧光定量RT-PCR 扩增曲线 | 第56-58页 |
| ·熔解曲线 | 第58-60页 |
| ·荧光定量标准曲线 | 第60页 |
| ·在脂肪组织中研究鸡Lipin1 基因在不同能量水平饲粮间的表达差异 | 第60-61页 |
| ·在肝脏组织中研究鸡Lipin1 基因在不同能量水平饲粮间的表达差异 | 第61-62页 |
| ·肝脏组织中鸡Lipin1 基因表达水平与表型指标的关联分析 | 第62-64页 |
| ·肝脏组织中鸡 Lipin1 基因表达水平与血清相关生化指标的关联分析 | 第64-66页 |
| ·结论与讨论 | 第66-70页 |
| ·荧光定量PCR 的原理 | 第66-67页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第67页 |
| ·鸡Lipin1 基因在不同能量水平饲粮间的表达差异 | 第67-68页 |
| ·肝脏组织中鸡Lipin1 基因表达水平与表型指标的关联分析 | 第68页 |
| ·肝脏组织中鸡Lipin1 基因表达水平与血清相关生化指标的关联分析 | 第68-70页 |
| 5 总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| ABSTRACT | 第77-80页 |
| 附录 | 第80-86页 |
| 附录1 鸡Lipin1-α全编码序列 | 第80-81页 |
| 附录2 鸡Lipin1-β全编码序列 | 第81-82页 |
| 附录3 鸡Lipin1-γ全编码序列 | 第82-84页 |
| 附录4 常用词语缩写 | 第84-86页 |
| 附录5 作者简介 | 第86页 |
