| 致谢 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 目次 | 第12-17页 |
| 第一部分 绪论 | 第17-29页 |
| 第1章 大熊猫研究综述 | 第17-23页 |
| ·大熊猫的分类与生存现状 | 第17-19页 |
| ·大熊猫保护遗传学的研究现状 | 第19-23页 |
| ·保护遗传学的概念 | 第19-20页 |
| ·大熊猫的非损伤取样和DNA提取 | 第20页 |
| ·大熊猫保护遗传学研究 | 第20-23页 |
| 第2章 主要组织相容性复合体(MHC)及其应用 | 第23-28页 |
| ·MHC的分类和结构 | 第24-25页 |
| ·MHC基因的多态性维持机制 | 第25-26页 |
| ·MHC在保护遗传学中的应用 | 第26-28页 |
| 第3章 立论依据、研究内容和目的 | 第28-29页 |
| 第二部分 研究内容 | 第29-98页 |
| 第4章 磁珠富集杂交cDNA方法的建立及Aime-MHC基因分离 | 第29-52页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·样品来源 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器和设备 | 第29页 |
| ·实验方法和步骤 | 第29-37页 |
| ·血液总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·第一链全长cDNA的合成及扩增 | 第30-32页 |
| ·第一链全长cDNA的合成 | 第30-31页 |
| ·第一链全长cDNA的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·MHC基因生物素化探针的标记 | 第32-33页 |
| ·生物素化探针的PCR标记 | 第32-33页 |
| ·生物素化探针标记效率的检测及探针的纯化 | 第33页 |
| ·磁珠富集杂交 | 第33-35页 |
| ·生物素化MHC基因DNA探针与全长cDNA的杂交 | 第33页 |
| ·磁珠富集 | 第33-34页 |
| ·杂交洗脱液的PCR丰富 | 第34-35页 |
| ·MHC cDNA的克隆及测序 | 第35-37页 |
| ·洗脱液DNA的纯化 | 第35页 |
| ·回收片段的转化 | 第35页 |
| ·全长cDNA的筛选 | 第35-37页 |
| ·全长cDNA的测序 | 第37页 |
| ·数据处理 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-51页 |
| ·大熊猫血液cDNA的PCR扩增结果 | 第37-38页 |
| ·大熊猫Ⅱ类MHC基因生物素化探针的标记结果 | 第38页 |
| ·杂交产物的PCR丰富及回收 | 第38-39页 |
| ·大熊猫Ⅱ类MHC基因cDNA克隆的结果 | 第39-41页 |
| ·大熊猫DRA基因cDNA克隆的结果 | 第39页 |
| ·大熊猫DRB基因cDNA克隆的结果 | 第39-40页 |
| ·大熊猫DQA基因cDNA克隆的结果 | 第40页 |
| ·大熊猫DQB基因cDNA克隆的结果 | 第40-41页 |
| ·大熊猫Ⅱ类MHC功能基因的鉴定及全长cDNA序列分析 | 第41-51页 |
| ·大熊猫Ⅱ类MHC功能基因 | 第41-42页 |
| ·磁珠富集杂交cDNA分离MHC基因的效率 | 第42-43页 |
| ·大熊猫DRA基因全长cDNA的序列分析 | 第43-45页 |
| ·大熊猫DRB基因全长cDNA的序列分析 | 第45-47页 |
| ·大熊猫DQA基因全长cDNA的序列分析 | 第47-49页 |
| ·大熊猫DQB基因全长cDNA的序列分析 | 第49-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第5章 大熊猫DRB3部分基因组序列的克隆 | 第52-60页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·样品来源 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要仪器和设备 | 第52-53页 |
| ·实验方法和步骤 | 第53-57页 |
| ·血液基因组DNA的提取 | 第53页 |
| ·DRB3内含子的扩增 | 第53-56页 |
| ·DRB3 intron1的LA-PCR扩增 | 第53-54页 |
| ·分段扩增DRB3 intron1及克隆测序 | 第54-55页 |
| ·DRB3部分intron2序列的扩增 | 第55-56页 |
| ·DRB3 intron1和intron2扩增终产物的连接、克隆和测序 | 第56页 |
| ·数据处理 | 第56-57页 |
| ·结果和讨论 | 第57-59页 |
| ·大熊猫DRB3基因内含子的扩增及克隆 | 第57-58页 |
| ·DRB3座位基因组序列分析 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第6章 大熊猫Ⅱ类MHC功能基因的适应性进化研究 | 第60-98页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·样品来源 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器和设备 | 第60-61页 |
| ·实验方法和步骤 | 第61-69页 |
| ·基因组DNA的提取和纯化 | 第61-62页 |
| ·血液基因组DNA的提取 | 第61页 |
| ·血棉和皮张基因组DNA的提取 | 第61-62页 |
| ·粪便基因组DNA的提取 | 第62页 |
| ·座位特异性PCR-SSCP基因分型 | 第62-67页 |
| ·座位特异性引物的设计 | 第62-63页 |
| ·大熊猫Ⅱ类MHC基因exon2的座位特异性PCR | 第63-65页 |
| ·大熊猫Ⅱ类MHC基因exon2种群变异的SSCP分析 | 第65-67页 |
| ·数据处理 | 第67-69页 |
| ·序列比对和分析 | 第67-68页 |
| ·哈-温平衡和杂合度的检测 | 第68页 |
| ·MHC基因内重组的检测 | 第68-69页 |
| ·存在重组情况下估算正选择作用 | 第69页 |
| ·结果 | 第69-89页 |
| ·大熊猫基因组DNA的提取结果 | 第69-70页 |
| ·大熊猫种群Ⅱ类MHC基因的PCR-SSCP结果 | 第70-77页 |
| ·大熊猫种群DRA基因exon2的PCR扩增及SSCP结果 | 第70-72页 |
| ·大熊猫种群DRB3基因exon2的PCR扩增及SSCP结果 | 第72-73页 |
| ·大熊猫种群DQA1基因exon2的PCR扩增及SSCP结果 | 第73-74页 |
| ·大熊猫种群DQA2基因exon2的PCR扩增及SSCP结果 | 第74-75页 |
| ·大熊猫种群DQB1基因exon2的PCR扩增及SSCP结果 | 第75-76页 |
| ·大熊猫种群DQB2基因exon2的PCR扩增及SSCP结果 | 第76-77页 |
| ·大熊猫Ⅱ类MHC基因的遗传多样性 | 第77-89页 |
| ·大熊猫MHC基因的等位基因、分布频率及杂合度 | 第77-82页 |
| ·大熊猫MHC基因的序列变异和氨基酸杂合度 | 第82-85页 |
| ·大熊猫MHC基因的重组、正选择及净化选择 | 第85-89页 |
| ·讨论 | 第89-95页 |
| ·大熊猫MHC基因的等位基因丰度及单态性 | 第89-90页 |
| ·大熊猫MHC基因的多态性水平 | 第90页 |
| ·亚种内及亚种间等位基因分布的差异 | 第90-93页 |
| ·大熊猫亚种间MHC基因的正选择和净化选择差异 | 第93-94页 |
| ·大熊猫MHC基因的平衡选择和基因内重组 | 第94-95页 |
| ·小结 | 第95-98页 |
| 第三部分 结论 | 第98-102页 |
| 第7章 主要结论、创新点及展望 | 第98-102页 |
| ·本研究的主要结论 | 第98-100页 |
| ·本研究的创新点 | 第100-101页 |
| ·展望 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-113页 |
| 作者简历及博士期间的科研成果 | 第113页 |
