| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-46页 |
| ·纤维素资源概述 | 第13-19页 |
| ·纤维素原料 | 第15-17页 |
| ·纤维素结构 | 第17-18页 |
| ·纤维素的降解 | 第18-19页 |
| ·纤维素酶 | 第19-32页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第19-21页 |
| ·纤维素酶的组成和结构 | 第21-25页 |
| ·纤维素酶的催化机制 | 第25-29页 |
| ·纤维素酶的克隆与表达 | 第29-32页 |
| ·蛋白质工程 | 第32-45页 |
| ·蛋白质工程的理性设计 | 第33-34页 |
| ·蛋白质工程的非理性设计——体外定向进化 | 第34-45页 |
| ·本研究目的和意义 | 第45-46页 |
| 2 陆地、海洋微生物纤维素酶活性菌株的筛选及鉴定 | 第46-58页 |
| ·材料和方法 | 第46-50页 |
| ·材料 | 第46-48页 |
| ·方法 | 第48-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-57页 |
| ·菌株的筛选 | 第50页 |
| ·菌株的鉴定 | 第50-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 3 芽胞杆菌内切葡聚糖酶基因的克隆活性及进化树分析 | 第58-67页 |
| ·材料和方法 | 第58-62页 |
| ·材料 | 第58-60页 |
| ·方法 | 第60-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-66页 |
| ·芽胞内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第62-63页 |
| ·不同克隆的水解圈活性检测 | 第63页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的序列测定及进化树分析 | 第63-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| ·芽胞杆菌内切葡聚糖酶基因克隆与表达 | 第66页 |
| ·芽胞杆菌内切葡聚糖酶的进化树分析 | 第66-67页 |
| 4 枯草芽胞杆菌内切葡聚糖酶基因的体外分子进化 | 第67-96页 |
| ·材料和方法 | 第67-76页 |
| ·材料 | 第67-70页 |
| ·方法 | 第70-76页 |
| ·结果与分析 | 第76-90页 |
| ·易错PCR法构建突变体文库 | 第76页 |
| ·DNA shuffling法构建突变体文库 | 第76-78页 |
| ·高活性突变子的筛选及序列分析 | 第78-82页 |
| ·突变体蛋白的表达与纯化 | 第82-84页 |
| ·酶活力的测定 | 第84-88页 |
| ·同源建模分析蛋白质构象 | 第88-90页 |
| ·讨论 | 第90-96页 |
| ·易错PCR构建突变体文库 | 第90-91页 |
| ·DNA改组叠加有益突变 | 第91-92页 |
| ·突变体库的筛选 | 第92-93页 |
| ·突变酶的酶学性质 | 第93页 |
| ·突变酶的三维结构模拟 | 第93-96页 |
| 5 枯草芽胞杆菌内切葡聚糖酶基因的定点诱变 | 第96-109页 |
| ·材料和方法 | 第96-99页 |
| ·材料 | 第96-97页 |
| ·方法 | 第97-99页 |
| ·结果与分析 | 第99-106页 |
| ·野生酶和突变酶120、272位氨基酸定点突变 | 第99-102页 |
| ·野生酶69位和263-265位的饱和突变 | 第102-106页 |
| ·讨论 | 第106-109页 |
| ·定点突变的理性设计 | 第106-107页 |
| ·定点突变的策略 | 第107页 |
| ·120和272位氨基酸残基功能分析 | 第107-108页 |
| ·69和263-264-265位氨基酸残基功能分析 | 第108-109页 |
| 6 总结 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 附录:已发表的文章 | 第124页 |