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心叶烟交替氧化酶基因(NgAOX1α)的分离及其表达特性分析

中文摘要第1-12页
ABSTRACT第12-14页
1 引言第14-26页
   ·植物的主动防御系统第14-15页
   ·植物系统获得性抗性第15-18页
     ·SA 介导的植物系统获得抗性第16页
     ·JA/茉莉酸甲酯和ET 介导的植物系统获得抗性第16-18页
   ·植物中交替氧化酶基因的研究进展第18-24页
     ·交替氧化途径第18-19页
     ·交替氧化酶基因的克隆第19-20页
     ·交替氧化酶基因的分类第20-21页
     ·交替氧化酶基因的结构特点第21-23页
     ·交替氧化酶基因的功能第23-24页
   ·本研究的目的及意义第24-26页
2 材料与方法第26-52页
   ·实验材料第26-29页
     ·植物材料第26页
     ·植物材料培养与处理第26页
     ·菌株与质粒第26-27页
     ·酶与各种生化试剂第27页
     ·PCR 引物第27-29页
   ·实验方法第29-52页
     ·植物总RNA 的提取及检测第29-31页
     ·cDNA 全长序列的获得第31-35页
     ·植物总DNA 的提取及纯化第35-36页
     ·NgAOX1a 全长基因组序列的获得第36-37页
     ·NgAOX1a 基因启动子的分离第37-39页
     ·目的片段的回收第39-40页
     ·目的片段与克隆载体的连接第40-41页
     ·大肠杆菌感受态细胞制备第41页
     ·大肠杆菌感受态细胞的转化第41页
     ·质粒DNA 的提取第41-44页
     ·对重组质粒的鉴定第44-45页
     ·半定量RT-PCR 检测目的基因的表达第45-46页
     ·Northern 杂交第46-47页
     ·Southern 杂交第47-48页
     ·植物表达载体的构建第48-50页
     ·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备、转化第50页
     ·农杆菌介导转化烟草第50-52页
3 结果与分析第52-74页
   ·心叶烟NGAOX1A 基因的分离第52-58页
     ·心叶烟RNA 的提取及反转录第52页
     ·NgAOX1a 基因中间片段的分离第52-53页
     ·NgAOX1a 5′片段的分离第53-54页
     ·NgAOX1a 3′片段的分离第54页
     ·NgAOX1a 全长cDNA 的分离第54-56页
     ·NgAOX1a 基因组DNA 的分离第56页
     ·NgAOX1a 启动子的分离第56-57页
     ·NgAOX1a 启动子缺失片段的获得第57-58页
   ·NGAOX1A 的序列分析第58-64页
     ·NgAOX1a 的全长cDNA 分析第58-60页
     ·NgAOX1a 基因编码蛋白序列分析第60-62页
     ·NgAOX1a 基因组序列分析第62-63页
     ·NgAOX1a 基因启动子序列分析第63-64页
   ·NGAOX1A 基因在心叶烟基因组中的拷贝数分析第64-65页
   ·NGAOX1A 基因在外界胁迫条件下的表达特性分析第65-68页
     ·非生物胁迫条件下NgAOX1a 基因在mRNA 水平的变化第65-67页
     ·生物胁迫条件下NgAOX1a 基因在mRNA 水平的变化第67-68页
   ·NGAOX1A 基因在转基因烟草中的表达第68-71页
     ·转基因烟草表达载体的构建第68-69页
     ·再生植株的获得第69-71页
     ·T1 代转基因植株的PCR 鉴定第71页
   ·NGAOX1A 启动子缺失分析第71-74页
     ·p81121 载体酶切位点的改造第71-73页
     ·表达载体的构建第73页
     ·再生植株的获得第73-74页
4 讨论第74-77页
   ·NGAOX1A 基因序列特征分析第74页
   ·NGAOX1A 在外界胁迫条件下的诱导表达分析第74-75页
   ·NGAOX1A 基因启动子的克隆第75-77页
5 结论第77-78页
参考文献第78-89页
附录第89-92页
致谢第92-93页
附:硕士阶段已发表的论文第93页

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