| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1. 前言 | 第13-25页 |
| ·植酸酶的种类与来源 | 第13-14页 |
| ·植酸酶的种类 | 第13-14页 |
| ·植酸酶的来源 | 第14页 |
| ·植酸酶的研究进展 | 第14-19页 |
| ·植酸酶的基因工程 | 第15-17页 |
| ·植酸酶的分子生物学 | 第17-19页 |
| ·毕赤酵母的研究进展 | 第19-21页 |
| ·毕赤酵母的生物学和遗传学特性 | 第20页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的优点 | 第20-21页 |
| ·糖基化研究进展 | 第21-24页 |
| ·糖生物学 | 第21-22页 |
| ·糖链的生物学功能 | 第22-23页 |
| ·植酸酶糖基化研究进展 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第25-44页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·主要工具酶及试剂 | 第25页 |
| ·主要实验仪器 | 第25页 |
| ·主要试剂的配制 | 第25-29页 |
| ·培养基的配制 | 第25-27页 |
| ·实验相关溶液的配制 | 第27-29页 |
| ·实验方法 | 第29-44页 |
| ·植酸酶基因的定点突变 | 第29-33页 |
| ·突变体及野生型植酸酶基因酵母分泌型表达载体的构建 | 第33-36页 |
| ·野生型及突变植酸酶基因在酵母中的诱导表达 | 第36-39页 |
| ·表达植酸酶及其纯化产物蛋白含量的测定 | 第39-40页 |
| ·表达产物及纯化后酶蛋白活性的测定——定磷法 | 第40-41页 |
| ·纯化后植酸酶酶蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第41-42页 |
| ·纯化后酶蛋白糖基化的去除 | 第42页 |
| ·野生型与突变植酸酶的酶学性质的测定 | 第42-44页 |
| 3. 结果与分析 | 第44-60页 |
| ·黑曲霉植酸酶基因的定点突变 | 第44-47页 |
| ·植酸酶phyA 基因的结构分析 | 第44-46页 |
| ·植酸酶基因的定点突变 | 第46-47页 |
| ·野生型及突变植酸酶基因酵母表达质粒的构建与表达 | 第47-49页 |
| ·酵母表达质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·电击转化毕赤酵母 | 第48-49页 |
| ·野生型及突变植酸酶phyA 基因在毕赤酵母中的高效表达 | 第49-50页 |
| ·重组酵母产酶曲线 | 第49-50页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第50页 |
| ·野生型及突变植酸酶酶学性质的研究 | 第50-60页 |
| ·野生型及突变植酸酶最适pH 测定 | 第50-53页 |
| ·野生型与突变植酸酶动力学参数的分析 | 第53-56页 |
| ·野生型及突变植酸酶最适反应温度的测定 | 第56-57页 |
| ·野生型及突变植酸酶热稳定性的研究 | 第57-58页 |
| ·热变性过程中野生型及突变植酸酶的构象变化分析 | 第58-60页 |
| 4. 讨论 | 第60-65页 |
| ·糖基化蛋白质组的研究 | 第60-61页 |
| ·糖基化对毕赤酵母表达的蛋白质的影响 | 第61-62页 |
| ·糖基化对重组植酸酶生物化学特征的影响 | 第62-65页 |
| ·糖基化对重组植酸酶酶活力与热稳定性的影响 | 第63-64页 |
| ·寡糖链对重组植酸酶最适pH 和等电点的影响 | 第64-65页 |
| 5. 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第78页 |