| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-37页 |
| 第一节 泡沫病毒 | 第14-22页 |
| ·分类与感染特点 | 第14-16页 |
| ·泡沫病毒的基因组结构与病毒蛋白表达 | 第16-18页 |
| ·泡沫病毒的复制周期 | 第18-21页 |
| ·泡沫病毒的转录激活调控 | 第21-22页 |
| 第二节 病毒感染与细胞周期 | 第22-27页 |
| ·细胞周期调控概述 | 第22-24页 |
| ·病毒蛋白对细胞周期的G0/G1期的阻滞 | 第24-25页 |
| ·病毒蛋白对细胞周期的GZ/M期的阻滞 | 第25-27页 |
| 第三节 病毒感染与microRNA调控 | 第27-34页 |
| ·microRNA的发现 | 第27-28页 |
| ·病毒相关的miRNA类型及其作用的分子机制 | 第28-29页 |
| ·病毒miRNA对靶序列的选择 | 第29-31页 |
| ·病毒miRNA的作用特点 | 第31-32页 |
| ·宿主miRNA对病毒感染的影响 | 第32-34页 |
| 第四节 本研究的目的和意义 | 第34-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-60页 |
| 第一节 材料 | 第37-44页 |
| ·菌种与细胞 | 第37页 |
| ·抗体及其相关产品 | 第37页 |
| ·常用试剂盒 | 第37-40页 |
| ·引物 | 第40页 |
| ·限制性内切酶及修饰酶 | 第40页 |
| ·常用克隆表达载体 | 第40-44页 |
| ·构建基因表达质粒 | 第44页 |
| 第二节 实验方法 | 第44-60页 |
| ·外源DNA转化大肠杆菌及T-A克隆转化 | 第44-45页 |
| ·煮沸法提取质粒DNA | 第45-46页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第46页 |
| ·细胞总RNA的抽提 | 第46-47页 |
| ·细胞培养 | 第47页 |
| ·细胞转染 | 第47-50页 |
| ·稳定细胞系的建立 | 第50页 |
| ·细胞增殖检测[~3H]胸腺嘧啶掺入实验 | 第50-51页 |
| ·胞蛋白裂解液的制备及其浓度检测 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE制备与免疫印迹杂交 | 第52-54页 |
| ·流式检测细胞周期及凋亡 | 第54-55页 |
| ·免疫荧光实验 | 第55-56页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第56-57页 |
| ·逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第57-58页 |
| ·实时定量RT-PCR检测 | 第58-60页 |
| 第三章 结果 | 第60-84页 |
| 第一节 牛泡沫病毒的转录激活子Borf1影响宿主周期蛋白表达 | 第60-63页 |
| ·牛泡洙病毒转录激活子Borf1可诱发细胞G1期阻滞 | 第60-61页 |
| ·Borf1对细胞周期相关基因mRNA表达水平的影响 | 第61-62页 |
| ·Borf1对细胞周期相关基因蛋白表达水平的影响 | 第62-63页 |
| 第二节 RNA沉默抑制子p19调控细胞周期相关蛋白表达 | 第63-72页 |
| ·构建及检测稳定表达p19的HEK293细胞系 | 第63-64页 |
| ·P19蛋白限制细胞增殖并可引发293细胞的G2/M期阻滞 | 第64-66页 |
| ·P19蛋白在促细胞凋亡中的作用 | 第66-67页 |
| ·P19对细胞周期相关基因的mRNA表达谱的影响 | 第67页 |
| ·P19对细胞周期相关基因的蛋白表达谱的影响 | 第67-72页 |
| 第三节 宿主microRNA对泡沫病毒转录激活因子Bel1的表达抑制 | 第72-84页 |
| ·人泡沫病毒的复制受宿主小RNA的调控 | 第72-73页 |
| ·microRNA真核表达质粒及携带靶位点的EGFP报告质粒的构建 | 第73-74页 |
| ·has-miR-491-5p在人组织中的表达谱检测 | 第74-75页 |
| ·has-miR-491-5p可显著抑制pEGFP-C1-T491的表达 | 第75-78页 |
| ·has-miR-491-5p对pEGFP-C1-T491表达抑制的特异性研究 | 第78-80页 |
| ·has-miR-491-5p介导的基因抑制作用发生于mRNA水平 | 第80-81页 |
| ·has-miR-491-5p可特异性抑制HFV病毒感染中的Bel1蛋白的表达 | 第81-84页 |
| 第四章 讨论 | 第84-91页 |
| 第一节 Borf1可负调控宿主细胞周期 | 第84-85页 |
| 第二节 番茄丛矮病毒的p19蛋白对动物细胞周期有负调控作用 | 第85-87页 |
| ·p19对成熟促进因子(MPF)的影响 | 第85-86页 |
| ·p19对cyclin A2/cdk1活性的影响 | 第86页 |
| ·p19有可能作用于多个细胞周期蛋白调控位点 | 第86-87页 |
| 第三节 宿主microRNA对HFV转录激活蛋白Bel1的负调控 | 第87-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-101页 |
| 附录1 个人履历 | 第101-102页 |
| 附录2 在学期间完成的论文 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
