| 缩略语表 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-31页 |
| 1 植物抗寒研究进展 | 第14-24页 |
| ·植物抗寒生理生化研究进展 | 第14-19页 |
| ·细胞膜系统与抗寒性 | 第14-15页 |
| ·抗氧化系统与抗寒性 | 第15-17页 |
| ·渗透调节物质与抗寒性 | 第17-19页 |
| ·植物抗寒分子机理研究进展 | 第19-24页 |
| ·依赖ABA响应途径 | 第19-21页 |
| ·不依赖ABA响应途径 | 第21-24页 |
| 2 果树抗寒研究进展 | 第24-29页 |
| ·果树抗寒生理生化研究进展 | 第25-28页 |
| ·形态结构与果树抗寒性 | 第25-26页 |
| ·代谢物质与果树抗寒性 | 第26-27页 |
| ·激素物质与果树抗寒性 | 第27页 |
| ·遗传物质与果树抗寒性 | 第27-28页 |
| ·果树抗寒基因工程研究进展 | 第28-29页 |
| 3 课题的提出和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 柑橘CBF及相关基因在胁迫条件下的表达分析 | 第31-45页 |
| 1 前言 | 第31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-34页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·枳壳种苗 | 第31-32页 |
| ·脐橙愈伤组织 | 第32页 |
| ·试验方法 | 第32-34页 |
| ·RNase灭活 | 第32页 |
| ·RNA提取 | 第32-33页 |
| ·RNA质量检测 | 第33页 |
| ·反转录 | 第33页 |
| ·PCR | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-43页 |
| ·枳PtCBF及其相关基因在胁迫条件下的表达 | 第34-39页 |
| ·枳PtCBF及其相关基因在低温胁迫条件下的表达分析 | 第34-37页 |
| ·枳PtCBF及其相关基因在外源ABA存在条件下的表达分析 | 第37-39页 |
| ·橙CsCBF及其他胁迫相关基因在胁迫条件下的表达 | 第39-43页 |
| ·橙CsCBF及其他胁迫相关基因在低温胁迫条件下的表达分析 | 第39-41页 |
| ·橙CsCBF及其他胁迫相关基因在盐胁迫条件下的表达分析 | 第41-42页 |
| ·橙CsCBF及其他胁迫相关基因在外源ABA存在条件下的表达分析 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 柑橘CBF基因组DNA的分离和生物信息学分析 | 第45-64页 |
| 1 前言 | 第45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-51页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·试验方法 | 第46-51页 |
| ·柑橘DNA提取 | 第46页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第46-47页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及成像 | 第47页 |
| ·目的片段纯化回收 | 第47页 |
| ·TA克隆 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第48页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆的增殖 | 第49页 |
| ·质粒DNA提取 | 第49页 |
| ·目的片段检测 | 第49-50页 |
| ·序列测定及结果处理 | 第50页 |
| ·生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-62页 |
| ·柑橘CBF基因组DNA序列及比对分析 | 第51-57页 |
| ·柑橘CBF氨基酸序列比对分析 | 第57-62页 |
| ·柑橘CBF蛋白的高级结构预测及亚细胞定位 | 第62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 柑橘CBF基因启动子序列的分离及元件分析 | 第64-75页 |
| 1 前言 | 第64-65页 |
| 2 材料与方法 | 第65-68页 |
| ·实验材料 | 第65页 |
| ·试验方法 | 第65-68页 |
| ·柑橘DNA提取 | 第65页 |
| ·基因组DNA单酶切 | 第65页 |
| ·质粒DNA双酶切 | 第65页 |
| ·接头片段连接 | 第65-66页 |
| ·接头介导PCR扩增 | 第66-67页 |
| ·未知片段的初步克隆测序 | 第67页 |
| ·未知序列的PCR验证 | 第67-68页 |
| ·未知序列的验证克隆测序 | 第68页 |
| ·生物信息学分析 | 第68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-72页 |
| ·柑橘CBF基因启动子接头介导PCR分离 | 第68-69页 |
| ·柑橘CBF启动子顺式作用元件分析 | 第69-72页 |
| 4 讨论 | 第72-75页 |
| 第五章 柑橘CBF基因启动子的烟草转化及初步鉴定 | 第75-86页 |
| 1 前言 | 第75页 |
| 2 材料与方法 | 第75-81页 |
| ·实验材料 | 第75-76页 |
| ·试验方法 | 第76-81页 |
| ·根癌农杆菌表达载体的构建 | 第76-78页 |
| ·柑橘DNA提取 | 第76页 |
| ·启动子PCR扩增 | 第76页 |
| ·启动子回收连接转化增殖 | 第76页 |
| ·启动子菌液PCR及双酶切 | 第76-77页 |
| ·pBI121载体双酶切 | 第77页 |
| ·启动子与载体连接 | 第77-78页 |
| ·表达载体转化大肠杆菌 | 第78页 |
| ·表达载体质粒提取 | 第78页 |
| ·根癌农杆菌工程菌的制备 | 第78-79页 |
| ·根癌农杆菌感受态制备 | 第78-79页 |
| ·表达载体转化根癌农杆菌 | 第79页 |
| ·根癌农杆菌阳性检测 | 第79页 |
| ·根癌农杆菌转化烟草 | 第79-80页 |
| ·烟草浸染及共培养 | 第79-80页 |
| ·烟草选择培养 | 第80页 |
| ·烟草生根培养 | 第80页 |
| ·烟草转基因植株鉴定 | 第80-81页 |
| ·烟草DNA提取 | 第80-81页 |
| ·PCR初步检测 | 第81页 |
| ·转基因阳性植株扩繁及移栽 | 第81页 |
| 3 结果与分析 | 第81-84页 |
| ·柑橘CBF表达载体的构建 | 第81-82页 |
| ·柑橘CBF启动子转化烟草 | 第82-83页 |
| ·柑橘CBF转基因烟草鉴定 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-86页 |
| 第六章 总结及展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-101页 |
| 附录Ⅰ 实验试剂及溶液的配制 | 第101-106页 |
| 1.细胞培养试剂 | 第101-102页 |
| 2.核酸抽提试剂 | 第102-104页 |
| 3.细胞转化试剂 | 第104页 |
| 4.质粒DNA抽提试剂 | 第104-105页 |
| 5.基因转移培养基 | 第105-106页 |
| 附录Ⅱ 攻读博士学位期间发表论文 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
