| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-53页 |
| 第一节 Parkin与泛素蛋白酶体体系 | 第14-29页 |
| ·泛素-蛋白酶体体系 | 第14-18页 |
| ·泛素(ubiquitin) | 第14-16页 |
| ·泛素化酶 | 第16页 |
| ·蛋白酶体(proteasome) | 第16-18页 |
| ·泛素连接酶的类型 | 第18-20页 |
| ·Parkin的结构和功能 | 第20-29页 |
| ·Parkin基因的发现 | 第20-21页 |
| ·Parkin的结构与功能 | 第21-25页 |
| ·Parkin突变与疾病发生 | 第25-29页 |
| 第二节 细胞结构与功能 | 第29-40页 |
| ·细胞结构的组成与功能 | 第29-30页 |
| ·微管的结构与功能 | 第30-33页 |
| ·微管的结构与组装 | 第30-31页 |
| ·微管结合蛋白 | 第31页 |
| ·微管药物及药物敏感性 | 第31-33页 |
| ·线粒体的结构与功能 | 第33-40页 |
| ·线粒体的结构和功能 | 第33-34页 |
| ·线粒体的动态性 | 第34-40页 |
| 第三节 Parkin与细胞结构相关蛋白的相互作用 | 第40-50页 |
| ·Parkin与微管之间的相互作用 | 第40-44页 |
| ·Parkin与微管的相互作用在帕金森症中的作用 | 第40-43页 |
| ·Parkin与微管的相互作用在癌症中的作用 | 第43-44页 |
| ·Parkin与线粒体相关蛋白的相互作用 | 第44-50页 |
| 第四节 本研究的目的和意义 | 第50-53页 |
| ·本研究的目的 | 第50-51页 |
| ·本研究的意义 | 第51-53页 |
| 第二章 Parkin与微管的相互作用能够增强乳腺癌对紫杉醇的敏感性 | 第53-77页 |
| 第一节 材料与方法 | 第54-61页 |
| ·细胞系 | 第54页 |
| ·本文用到的质粒和质粒转染 | 第54-55页 |
| ·本章用到的质粒 | 第54-55页 |
| ·质粒的提取和转染 | 第55页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·MBP融合蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| ·诱导表达 | 第55-56页 |
| ·过柱纯化 | 第56页 |
| ·析柱再生 | 第56页 |
| ·细胞系,病毒和肿瘤组织样本 | 第56-57页 |
| ·化疗反应的评价 | 第57页 |
| ·原代培养的乳腺癌细胞中紫杉醇敏感性的检测 | 第57页 |
| ·免疫荧光染色实验 | 第57-58页 |
| ·Western blotting | 第58页 |
| ·制备多聚体和二聚体微管蛋白 | 第58页 |
| ·体外微管聚合实验 | 第58页 |
| ·微管与紫杉醇的相互作用 | 第58-59页 |
| ·细胞毒性试验 | 第59页 |
| ·免疫组化实验 | 第59-60页 |
| ·实验结果的统计 | 第60-61页 |
| 第二节 实验结果 | 第61-75页 |
| ·Parkin能够结合在微管的外部能够促进微管与紫杉醇的结合 | 第61-63页 |
| ·Parkin结合在微管的外部,体外纯化的Parkin能够促进微管与紫杉醇的结合 | 第61-62页 |
| ·Parkin能够促进细胞内微管与紫杉醇的结合 | 第62-63页 |
| ·Parkin能够增强紫杉醇所诱导的微管的组装和稳定性 | 第63-67页 |
| ·Parkin能够促进紫杉醇所诱导的微管的组装 | 第63-65页 |
| ·Parkin能够增强紫杉醇所诱导的微管的稳定性 | 第65-67页 |
| ·Parkin能够增强紫杉醇所诱导的多核化以及细胞凋亡从而增强了乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性 | 第67-71页 |
| ·Parkin能够促进紫杉醇所诱导的细胞多核化 | 第67-68页 |
| ·Parkin能够促进紫杉醇所诱导的细胞凋亡 | 第68-69页 |
| ·Parkin能够增强乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性 | 第69-71页 |
| ·Parkin的表达水平能够预测乳腺癌对于紫杉醇治疗的反应 | 第71-75页 |
| ·Parkin在乳腺癌组织中的表达水平 | 第71-72页 |
| ·Parkin的表达水平对紫杉醇治疗的反应 | 第72-73页 |
| ·原代培养的乳腺癌细胞中Parkin的表达水平与紫杉醇的敏感性成正相关 | 第73-75页 |
| 第三节 讨论 | 第75-77页 |
| 第三章 Parkin能够使Drp1泛素化通过蛋白酶体进行降解:帕金森症中线粒体动态性的异常的原因 | 第77-108页 |
| 第一节 材料与方法 | 第79-84页 |
| ·本章用到的质粒 | 第79-80页 |
| ·抗体 | 第80-81页 |
| ·细胞系,siRNA和质粒转染 | 第81页 |
| ·蛋白降解半衰期的测定 | 第81-82页 |
| ·免疫共沉淀以及MBP pull-down实验 | 第82页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第82页 |
| ·体外MBP pull-down实验 | 第82页 |
| ·蛋白质的泛素化实验 | 第82页 |
| ·细胞内泛素化 | 第82页 |
| ·体外泛素化 | 第82页 |
| ·免疫荧光和免疫印迹实验所述过程与上一章相同 | 第82页 |
| ·帕金森症小鼠模型的制作 | 第82-83页 |
| ·脑组织样本的免疫组化 | 第83-84页 |
| 第二节 实验结果 | 第84-106页 |
| ·细胞内Parkin表达水平的改变能够影响线粒体的形态和分布 | 第84-87页 |
| ·过表达Parkin能够导致线粒体聚集在核周围 | 第84-85页 |
| ·沉默细胞内Parkin导致线粒体发生断裂 | 第85-87页 |
| ·Parkin能够使Drp1通过蛋白酶体进行降解 | 第87-90页 |
| ·Parkin表达水平的改变影响了Drp1的表达水平 | 第87-88页 |
| ·Parkin使Drp1通过蛋白酶体进行降解 | 第88-90页 |
| ·Parkin通过第二个Ring与Drp1在体内和体外相互作用 | 第90-93页 |
| ·Parkin与Drp1在体内和体外都有相互作用 | 第90-91页 |
| ·Parkin通过第二个Ring finger结构域与Drp1相互作用 | 第91-93页 |
| ·Parkin促进了Drp1的泛素化而其突变其影响了其泛素化 | 第93-98页 |
| ·Parkin能够促进细胞内Drp1的泛素化,Parkin突变体影响其泛素化 | 第93-94页 |
| ·Parkin介导了K-48位连接的Drp1的多聚泛素化 | 第94-95页 |
| ·在体外Parkin能够促进Drp1的泛素化 | 第95-96页 |
| ·Parkin的突变体影响了Drp1的泛素化降解 | 第96-98页 |
| ·外源表达的Parkin能够抑制由神经毒素所诱导的Drp1表达水平的上调以及线粒体的断裂 | 第98-100页 |
| ·神经毒素处理导致线粒体的断裂以及Drp1表达水平的上调,Parkin表达水平的下调 | 第98-99页 |
| ·外源表达的Parkin能够抑制由神经毒素诱导的线粒体的断裂以及Drp1水平的上调 | 第99-100页 |
| ·抑制Drp1能够阻止由神经毒素所诱导的线粒体的断裂以及细胞凋亡 | 第100-103页 |
| ·抑制Drp1能够明显的抑制由神经毒素所诱导的线粒体的断裂以及细胞凋亡 | 第100-102页 |
| ·帕金森症小鼠模型中抑制Drp1的功能能够减少多巴胺神经元细胞的凋亡 | 第102-103页 |
| ·帕金森症病人的脑组织样本中Parkin与Drp1的表达水平是负相关的 | 第103-106页 |
| 第三节 讨论 | 第106-108页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第108-114页 |
| ·Parkin能够调节乳腺癌对以微管为靶点的紫杉醇的敏感性 | 第108-110页 |
| ·Parkin与Drp1相互作用调节线粒体的动态性的机制 | 第110-112页 |
| ·Parkin在帕金森症发生与肿瘤发生中的双重角色的意义 | 第112-114页 |
| 第五章 结论 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-131页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132-134页 |
| 附录 | 第134页 |
