| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 符号与缩略语说明 | 第17-18页 |
| 前言 | 第18-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-45页 |
| 第一章 TCP及其母体农药生物降解的研究进展 | 第19-33页 |
| 1 毒死蜱及其生物降解的研究进展 | 第20-24页 |
| 1.1 毒死蜱的理化性质及用途 | 第20-21页 |
| 1.2 毒死蜱的生态毒性 | 第21-22页 |
| 1.3 毒死蜱在环境中的残留 | 第22页 |
| 1.4 毒死蜱微生物降解的研究进展 | 第22-24页 |
| 2 甲基毒死蜱及其生物降解的研究进展 | 第24-26页 |
| 2.1 甲基毒死蜱的理化性质及用途 | 第24-25页 |
| 2.2 甲基毒死蜱的生态毒性 | 第25页 |
| 2.3 甲基毒死蜱微生物降解的研究进展 | 第25-26页 |
| 3 绿草定及其生物降解研究进展 | 第26-27页 |
| 3.1 绿草定的理化性质及用途 | 第26页 |
| 3.2 绿草定的生态毒性及其生物降解的研究进展 | 第26-27页 |
| 4 绿草定-2-丁氧基乙酯及其研究进展 | 第27页 |
| 4.1 绿草定-2-丁氧基乙酯的理化性质及用途 | 第27页 |
| 4.2 绿草定-2-丁氧基乙酯的生态毒性及其微生物降解的研究进展 | 第27页 |
| 5 TCP及其生物降解的研究进展 | 第27-33页 |
| 5.1 TCP的理化性质 | 第27-28页 |
| 5.2 TCP的生态毒性 | 第28-29页 |
| 5.3 TCP在环境中的残留 | 第29页 |
| 5.4 TCP微生物降解的研究进展 | 第29-33页 |
| 第二章 微生物对卤代有机化合物的脱卤作用 | 第33-45页 |
| 1 降解卤代有机化合物的微生物 | 第33-35页 |
| 1.1 直接从受污染环境中分离降解菌株 | 第34页 |
| 1.2 利用物理或化学方法进行诱变育种 | 第34-35页 |
| 1.3 利用生物遗传学手段构建高效基因工程菌 | 第35页 |
| 2 卤代有机化合物脱卤的机制 | 第35-43页 |
| 2.1 氧化脱卤 | 第36-37页 |
| 2.2 还原脱卤 | 第37-39页 |
| 2.3 水解脱卤 | 第39页 |
| 2.4 脱卤化氢脱卤 | 第39-40页 |
| 2.5 水合脱卤 | 第40-41页 |
| 2.6 甲基转移脱卤 | 第41页 |
| 2.7 分子内取代脱卤 | 第41-42页 |
| 2.8 硫解脱卤 | 第42-43页 |
| 3 TCP微生物降解存在的问题及本研究的意义 | 第43-45页 |
| 第二部分 实验部分 | 第45-125页 |
| 第一章 TCP降解菌的分离和鉴定 | 第45-61页 |
| 1 材料与方法 | 第45-49页 |
| 1.1 菌株、培养基与试剂 | 第45页 |
| 1.2 降解菌株的分离筛选 | 第45-46页 |
| 1.3 降解菌株P2的培养特征及生理生化鉴定 | 第46页 |
| 1.4 降解菌株P2的16S rRNA基因序列的扩增与分析 | 第46-48页 |
| 1.5 降解菌株P2系统发育地位的确定 | 第48-49页 |
| 1.6 TCP降解实验 | 第49页 |
| 1.7 菌体生长量的测定 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-58页 |
| 2.1 TCP降解菌株的分离筛选 | 第49-51页 |
| 2.2 TCP降解菌株P2的菌落形态及生理生化特征 | 第51-52页 |
| 2.3 TCP降解菌株P2的基因组DNA提取 | 第52页 |
| 2.4 TCP降解菌株P2的系统发育分析 | 第52-53页 |
| 2.5 环境条件对菌株P2生长的影响 | 第53-57页 |
| 2.6 菌株P2的抗性谱 | 第57-58页 |
| 3 本章讨论 | 第58-59页 |
| 4 本章小结 | 第59-61页 |
| 第二章 TCP降解菌株P2降解特性的研究 | 第61-75页 |
| 1 材料与方法 | 第61-65页 |
| 1.1 菌株、培养基与试剂 | 第61-62页 |
| 1.2 菌株的培养和种子液的制备 | 第62页 |
| 1.3 菌株P2利用TCP为唯一碳源的生长和降解 | 第62页 |
| 1.4 温度对菌株P2降解TCP的影响 | 第62页 |
| 1.5 初始pH对菌株P2降解TCP的影响 | 第62页 |
| 1.6 TCP初始浓度对菌株P2降解TCP的影响 | 第62页 |
| 1.7 接种量对菌株P2降解TCP的影响 | 第62-63页 |
| 1.8 通气量对菌株P2降解TCP的影响 | 第63页 |
| 1.9 NaCl浓度对菌株P2降解TCP的影响 | 第63页 |
| 1.10 金属离子对菌株P2降解TCP的影响 | 第63页 |
| 1.11 菌株P2对不同底物降解的研究 | 第63页 |
| 1.12 菌体生长量的测定 | 第63页 |
| 1.13 高效液相色谱检测方法检测样品中底物的残留 | 第63-64页 |
| 1.14 氯离子含量的测定 | 第64-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-73页 |
| 2.1 TCP标准品的色谱图与标准工作曲线 | 第65页 |
| 2.2 菌株P2以TCP为唯一碳源的生长和降解 | 第65-67页 |
| 2.3 温度对菌株P2降解TCP的影响 | 第67页 |
| 2.4 pH对菌株P2降解TCP的影响 | 第67页 |
| 2.5 TCP初始浓度对菌株P2降解TCP的影响 | 第67-68页 |
| 2.6 接种量对菌株P2降解TCP的影响 | 第68-69页 |
| 2.7 通气量对菌株P2降解TCP的影响 | 第69-70页 |
| 2.8 NaCl浓度对菌株P2降解TCP的影响 | 第70页 |
| 2.9 金属离子对菌株P2降解TCP的影响 | 第70页 |
| 2.10 菌株P2对不同底物降解的研究 | 第70-72页 |
| 2.11 菌株P2降解TCP代谢产物的检测 | 第72-73页 |
| 3 本章讨论 | 第73页 |
| 4 本章小结 | 第73-75页 |
| 第三章 转座子标签法克隆TCP脱氯酶基因簇 | 第75-95页 |
| 1 材料与方法 | 第75-82页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第75-76页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第76页 |
| 1.3 质粒DNA的大量提取 | 第76-77页 |
| 1.4 Tn5转座子的导入与突变株的筛选 | 第77页 |
| 1.5 菌体基因组DNA的提取 | 第77页 |
| 1.6 PCR法验证突变株基因组中的转座子片段 | 第77-79页 |
| 1.7 转座子插入位置上下游序列的PCR扩增 | 第79-81页 |
| 1.8 DNA片段回收 | 第81页 |
| 1.9 一步法感受态细胞的制备 | 第81页 |
| 1.10 PCR产物的T/A克隆和酶连产物的转化 | 第81页 |
| 1.11 DNA序列测定 | 第81页 |
| 1.12 高效液相色谱检测方法测定样品中TCP含量 | 第81-82页 |
| 1.13 DNA序列分析软件 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-91页 |
| 2.1 突变株的筛选与鉴定 | 第82-83页 |
| 2.2 突变株中插入转座子序列的PCR验证 | 第83页 |
| 2.3 突变株中转座子插入位置上下游序列的PCR扩增 | 第83-84页 |
| 2.4 突变株中转座子插入位置上下游序列的拼接与分析 | 第84-91页 |
| 3 本章讨论 | 第91-92页 |
| 4 本章小结 | 第92-95页 |
| 第四章 TCP脱氯酶基因的表达及其产物的特性研究 | 第95-117页 |
| 1 材料与方法 | 第95-103页 |
| 1.1 试剂和培养基 | 第95-96页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第96页 |
| 1.3 质粒DNA的提取 | 第96页 |
| 1.4 菌体总DNA的提取 | 第96页 |
| 1.5 一步法感受态细胞的制备与转化 | 第96页 |
| 1.6 基因tcpB1和tcpA1的PCR扩增 | 第96-97页 |
| 1.7 基因tcpB1和tcpA1表达菌株的构建 | 第97-99页 |
| 1.8 DNA片段的回收、酶连与转化 | 第99页 |
| 1.9 重组表达菌株对TCP降解的研究 | 第99页 |
| 1.10 基因tcpB1和tcpA1的诱导表达及其产物的纯化 | 第99-100页 |
| 1.11 考马斯亮蓝G-250法检测蛋白质含量 | 第100页 |
| 1.12 TcpA1酶活性检测的反应体系 | 第100-101页 |
| 1.13 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第101-102页 |
| 1.14 TcpA1酶学特性的研究 | 第102页 |
| 1.15 酶催化反应液中残留底物和代谢产物的检测 | 第102-103页 |
| 2 结果与分析 | 第103-115页 |
| 2.1 表达载体pET29a-tcpB1和pET29a-tcpA1的构建 | 第103-104页 |
| 2.2 表达菌株对TCP降解的研究 | 第104-106页 |
| 2.3 表达菌株中基因tcpB1和tcpA1的诱导表达分析 | 第106-107页 |
| 2.4 酶蛋白的纯化和酶TcpA1活性的检测 | 第107-110页 |
| 2.5 环境因子对酶TcpA1活性的影响 | 第110-112页 |
| 2.6 酶TcpA1的底物特异性及其动力学研究 | 第112-113页 |
| 2.7 酶TcpA1催化TCP脱氯反应的产物鉴定 | 第113页 |
| 2.8 酶TcpA1和TcpB1在TCP脱氯反应中的作用 | 第113-115页 |
| 3 本章讨论 | 第115-116页 |
| 4 本章小结 | 第116-117页 |
| 第五章 TCP污染土壤生物修复的初步研究 | 第117-125页 |
| 1 材料与方法 | 第117-119页 |
| 1.1 菌株、培养基与试剂 | 第117页 |
| 1.2 供试土壤 | 第117-118页 |
| 1.3 菌株的培养和接种剂的制备 | 第118页 |
| 1.4 土壤中TCP的添加及接种剂的施用 | 第118页 |
| 1.5 土壤和韭菜中残留TCP含量的测定 | 第118-119页 |
| 2 结果和分析 | 第119-123页 |
| 2.1 样品中TCP检测的准确度和精密度试验 | 第119页 |
| 2.2 菌株P2对土壤中TCP的降解 | 第119-121页 |
| 2.3 土壤温度对菌株P2降解土壤中TCP的影响 | 第121页 |
| 2.4 土壤pH对菌株P2降解土壤中TCP的影响 | 第121-122页 |
| 2.5 土壤水分含量对菌株P2降解土壤中TCP的影响 | 第122-123页 |
| 3 本章讨论 | 第123-124页 |
| 4 本章小结 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-141页 |
| 全文总结 | 第141-143页 |
| 本论文主要创新点 | 第143-145页 |
| 下一步工作设想 | 第145-147页 |
| 附录一 文中所用培养基及试剂配方 | 第147-151页 |
| 附录二 菌株Cupriavidus sp.P2相关基因序列 | 第151-157页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第157-159页 |
| 致谢 | 第159页 |
