| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 符号与缩略语说明 | 第15-16页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-37页 |
| 1 二苯醚类除草剂简介 | 第17-18页 |
| 2 二苯醚类除草剂的作用机制 | 第18-19页 |
| 3 二苯醚类除草剂的毒性和环境危害 | 第19-20页 |
| 4 二苯醚类除草剂的环境行为 | 第20-21页 |
| 5 二苯醚类除草剂微生物降解的研究进展 | 第21-24页 |
| 6 酯酶的研究简介 | 第24-27页 |
| 6.1 酯酶结构特点及其催化机制 | 第25-27页 |
| 6.2 酯酶的分类 | 第27页 |
| 7 手性除草剂的选择性降解 | 第27-29页 |
| 8 二苯醚类除草剂环境残留的生物修复研究 | 第29-30页 |
| 9 二苯醚类除草剂微生物降解研究存在的问题及本研究的意义 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-37页 |
| 第二部分 实验部分 | 第37-133页 |
| 第一章 乳氟禾草灵降解菌株的分离、筛选和鉴定 | 第37-65页 |
| 第一节 乳氟禾草灵降解菌株的分离筛选 | 第37-48页 |
| 1 材料与方法 | 第37-42页 |
| 1.1 培养基与菌株 | 第37页 |
| 1.2 供试农药及化学试剂 | 第37-38页 |
| 1.3 降解菌株的分离筛选 | 第38页 |
| 1.4 降解菌株的16S rRNA基因序列分析 | 第38-41页 |
| 1.5 降解菌株系统发育地位的确定 | 第41-42页 |
| 1.6 乳氟禾草灵含量测定方法 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-48页 |
| 2.1 乳氟禾草灵降解菌株的分离筛选 | 第42-44页 |
| 2.2 降解菌株的菌落形态及生理生化特征 | 第44-45页 |
| 2.3 降解菌株的系统发育树分析 | 第45-48页 |
| 第二节 乳氟禾草灵降解菌株M-8的分类地位研究 | 第48-61页 |
| 1 材料与方法 | 第48-53页 |
| 1.1 菌株、培养基和试剂 | 第48页 |
| 1.2 菌株基本生长特性 | 第48-49页 |
| 1.3 API鉴定系统分析 | 第49-50页 |
| 1.4 Biolog碳源利用分析 | 第50页 |
| 1.5 其他生理生化特性 | 第50页 |
| 1.6 细胞化学组成研究 | 第50-52页 |
| 1.7 G+C mol%含量的测定 | 第52-53页 |
| 1.8 DNA-DNA杂交分析 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-61页 |
| 2.1 生理生化特性 | 第53-57页 |
| 2.2 细胞化学组成研究 | 第57-59页 |
| 2.3 G+C mol%含量测定 | 第59页 |
| 2.4 DNA-DNA同源性分析 | 第59页 |
| 2.5 Terrimonas属新种Terrimonas rubra sp.nov.的描述 | 第59-61页 |
| 本章讨论 | 第61-62页 |
| 本章小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 第二章 乳氟禾草灵降解菌株的降解特性研究 | 第65-79页 |
| 1 材料与方法 | 第65-67页 |
| 1.1 培养基与菌株 | 第65页 |
| 1.2 供试农药及化学试剂 | 第65-66页 |
| 1.3 菌株的培养与种子液的制备 | 第66页 |
| 1.4 菌株对乳氟禾草灵降解效果的测定 | 第66页 |
| 1.5 环境因素对菌株降解乳氟禾草灵的影响 | 第66-67页 |
| 1.6 菌株降解乳氟禾草灵的立体异构选择性 | 第67页 |
| 1.7 菌株降解乳氟禾草灵的产物鉴定 | 第67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-75页 |
| 2.1 菌株对乳氟禾草灵的降解效果 | 第67-68页 |
| 2.2 温度对菌株降解乳氟禾草灵的影响 | 第68-69页 |
| 2.3 初始pH对菌株降解乳氟禾草灵的影响 | 第69-70页 |
| 2.4 外加不同碳氮源对菌株降解乳氟禾草灵的影响 | 第70页 |
| 2.5 菌株降解乳氟禾草灵的立体异构选择性 | 第70-72页 |
| 2.6 菌株对乳氟禾草灵的降解产物分析 | 第72-75页 |
| 本章讨论 | 第75-76页 |
| 本章小结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 第三章 乳氟禾草灵水解酶的基因克隆、表达及酶学特性研究 | 第79-119页 |
| 第一节 乳氟禾草灵水解酶基因的克隆 | 第79-95页 |
| 1 材料与方法 | 第79-85页 |
| 1.1 培养基与化学试剂 | 第79-80页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第80页 |
| 1.3 高效感受态细胞的制备 | 第80-81页 |
| 1.4 菌体总DNA的提取 | 第81-82页 |
| 1.5 基因文库构建路线图 | 第82-83页 |
| 1.6 总DNA的酶切与片段回收 | 第83页 |
| 1.7 酶连与转化 | 第83-84页 |
| 1.8 阳性克隆子对乳氟禾草灵降解效果测定 | 第84-85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-95页 |
| 2.1 菌株总DNA的提取和Sau3 AI部分酶切 | 第85页 |
| 2.2 阳性克隆子的筛选 | 第85-87页 |
| 2.3 测序及ORF分析 | 第87-88页 |
| 2.4 lacH和lacE核酸序列分析 | 第88页 |
| 2.5 信号肽分析 | 第88-89页 |
| 2.6 LacH和LacE氨基酸序列分析 | 第89-90页 |
| 2.7 LacH和LacE在酯酶家族中的分类地位 | 第90-95页 |
| 第二节 酯酶LacH和LacE的表达与纯化 | 第95-105页 |
| 1 材料与方法 | 第95-101页 |
| 1.1 培养基与化学试剂 | 第95页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第95-96页 |
| 1.3 普通感受态细胞的制备 | 第96页 |
| 1.4 乳氟禾草灵水解酶基因的PCR扩增 | 第96-97页 |
| 1.5 构建表达载体 | 第97-99页 |
| 1.6 表达菌株的构建和诱导表达 | 第99页 |
| 1.7 酯酶的纯化 | 第99-100页 |
| 1.8 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第100-101页 |
| 1.9 LacH和LacE的功能验证 | 第101页 |
| 2 结果与分析 | 第101-105页 |
| 2.1 lacH和lacE的PCR扩增 | 第101-102页 |
| 2.2 乳氟禾草灵水解酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第102页 |
| 2.3 乳氟禾草灵水解酶的纯化 | 第102-103页 |
| 2.4 LacH和LacE的功能验证 | 第103-105页 |
| 第三节 酯酶LacH和LacE的酶学性质研究 | 第105-114页 |
| 1 材料与方法 | 第105-106页 |
| 1.1 化学试剂 | 第105页 |
| 1.2 酶活力测定 | 第105页 |
| 1.3 温度对酶活力的影响 | 第105-106页 |
| 1.4 pH对酶活力的影响 | 第106页 |
| 1.5 金属离子对酶活力的影响 | 第106页 |
| 1.6 LacH和LacE对乳氟禾草灵异构体的选择性降解 | 第106页 |
| 2 结果与分析 | 第106-114页 |
| 2.1 LacH和LacE的底物谱及相应的动力学参数 | 第106-107页 |
| 2.2 LacH和LacE的最适反应温度及热稳定性 | 第107-108页 |
| 2.3 LacH和LacE的最适pH | 第108-109页 |
| 2.4 金属离子对酶活力的影响 | 第109-111页 |
| 2.5 LacH和LacE对乳氟禾草灵异构体的选择性降解 | 第111-114页 |
| 本章讨论 | 第114-115页 |
| 本章小结 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-119页 |
| 第四章 菌株Za对玉米药害的解除效果研究 | 第119-133页 |
| 第一节 氨基三氟羧草醚对玉米生长的影响研究 | 第119-124页 |
| 1 材料与方法 | 第120-121页 |
| 1.1 菌株、培养基与试剂 | 第120页 |
| 1.2 供试土壤及种子 | 第120页 |
| 1.3 氨基三氟羧草醚的制备 | 第120页 |
| 1.4 供试土壤 | 第120-121页 |
| 1.5 种子催芽 | 第121页 |
| 1.6 盆栽试验 | 第121页 |
| 2 结果与分析 | 第121-124页 |
| 2.1 氨基三氟羧草醚对玉米幼苗株高的影响 | 第121-123页 |
| 2.2 氨基三氟羧草醚对玉米植株根系的影响 | 第123-124页 |
| 第二节 菌株Za对玉米药害的解除效果 | 第124-129页 |
| 1 材料与方法 | 第124-125页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第124页 |
| 1.2 供试土壤及种子 | 第124页 |
| 1.3 菌悬液的制备 | 第124页 |
| 1.4 供试土壤 | 第124页 |
| 1.5 种子催芽 | 第124-125页 |
| 1.6 盆栽试验 | 第125页 |
| 2 结果与分析 | 第125-129页 |
| 2.1 投加菌株Za对玉米幼苗株高的恢复 | 第125-127页 |
| 2.2 投加菌株Za对玉米幼苗根长的恢复 | 第127-129页 |
| 本章讨论 | 第129-130页 |
| 本章小结 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-133页 |
| 全文总结 | 第133-135页 |
| 博士论文主要创新点 | 第135-137页 |
| 附录Ⅰ 培养基及试剂配方 | 第137-139页 |
| 附录Ⅱ 基因序列 | 第139-143页 |
| 攻读博士学位期间发表和待发表的论文 | 第143-145页 |
| 致谢 | 第145页 |
