| 摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-19页 |
| 缩略词表 | 第19-21页 |
| 第一章 大肠杆菌环境压力诱导表达系统的构建及应用 | 第21-34页 |
| ·引言 | 第21-23页 |
| ·实验方案(技术路线与实验内容) | 第23-24页 |
| ·实验技术路线 | 第23页 |
| ·实验内容 | 第23-24页 |
| ·环境压力诱导表达系统的构建 | 第23-24页 |
| ·环境压力诱导表达系统的性质分析 | 第24页 |
| ·环境压力诱导表达系统在PHB发酵中的应用 | 第24页 |
| ·实验材料及方法 | 第24-29页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·实验相关菌株及质粒 | 第24页 |
| ·培养基配方 | 第24-25页 |
| ·分子操作酶及试剂盒 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-29页 |
| ·gfp及phbCAB基因表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·CaCl_2溶液的配制 | 第26页 |
| ·感受态细胞的制备方法 | 第26页 |
| ·质粒的化学转化 | 第26页 |
| ·质粒的快速检测 | 第26-27页 |
| ·质粒的碱裂解法提取 | 第27页 |
| ·琼脂糖电泳 | 第27-28页 |
| ·重组菌株发酵条件 | 第28页 |
| ·绿色荧光蛋白的表达分析 | 第28页 |
| ·PHB颗粒相差显微观测和荧光显微观测 | 第28页 |
| ·电子显微镜样品制备 | 第28页 |
| ·PHB检测分析 | 第28-29页 |
| ·实验结果 | 第29-33页 |
| ·环境压力诱导表达系统的构建 | 第29-30页 |
| ·环境压力诱导表达系统的分析 | 第30-31页 |
| ·环境压力诱导表达系统在PHB生产中的应用 | 第31-32页 |
| ·PHB颗粒的观察及分析 | 第32-33页 |
| ·本章结论 | 第33-34页 |
| 第二章 大肠杆菌乙酸代谢分析以及好氧发酵平台的构建 | 第34-49页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·实验方案(技术路线与实验内容) | 第35-36页 |
| ·实验技术路线 | 第35页 |
| ·实验内容 | 第35-36页 |
| ·乙酸代谢相关酶基因的敲除 | 第35页 |
| ·相关基因的缺失对乙酸及生物量积累的影响 | 第35-36页 |
| ·相关基因的缺失对PHB积累的影响 | 第36页 |
| ·相关基因的缺失对乙酸利用的影响 | 第36页 |
| ·实验材料及方法 | 第36-40页 |
| ·实验材料 | 第36-38页 |
| ·实验相关菌株及质粒 | 第36-37页 |
| ·培养基配方 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·基因敲除方法 | 第38-39页 |
| ·质粒pSCP及pHBS01的构建 | 第39页 |
| ·工程菌株的培养条件 | 第39-40页 |
| ·乙酸利用培养条件 | 第40页 |
| ·葡萄糖、乙酸及PHB的检测 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-47页 |
| ·基因poxB、pta及iclR的敲除 | 第40-41页 |
| ·低拷贝表达载体pSCP的构建 | 第41-42页 |
| ·各菌株生长曲线的比较 | 第42页 |
| ·pH非调控下相关基因的缺失对乙酸和生物量积累的影响 | 第42-43页 |
| ·pH调控下相关基因的缺失对乙酸和生物量积累的影响 | 第43-44页 |
| ·无机盐培养基中乙酸和生物量积累的比较 | 第44-45页 |
| ·相关基因的缺失对PHB积累的影响 | 第45页 |
| ·pta敲除对大肠杆菌乙酸利用的影响 | 第45-47页 |
| ·pH对大肠杆菌乙酸利用的影响 | 第47页 |
| ·本章结论 | 第47-49页 |
| 第三章 小RNA(sRNA)在大肠杆菌代谢工程中的应用 | 第49-58页 |
| ·引言 | 第49-50页 |
| ·实验方案(技术路线与实验内容) | 第50-51页 |
| ·实验技术路线 | 第50-51页 |
| ·实验内容 | 第51页 |
| ·工程菌株QZ1110的培养及代谢产物分析 | 第51页 |
| ·RyhB的过量表达对葡萄糖代谢的影响 | 第51页 |
| ·实验材料及方法 | 第51-53页 |
| ·实验相关菌株及质粒 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-53页 |
| ·sRNA表达质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·摇瓶培养条件 | 第53页 |
| ·相关代谢产物的检测分析 | 第53页 |
| ·实验结果 | 第53-57页 |
| ·RyhB表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·乙醛酸途径的激活对葡萄糖代谢的影响 | 第54-55页 |
| ·过量表达RyhB对葡萄糖代谢的影响 | 第55-57页 |
| ·本章结论 | 第57-58页 |
| 第四章 琥珀酸发酵以及琥珀酸和聚羟基丁酸酯(PHB)的联产 | 第58-69页 |
| ·引言 | 第58-59页 |
| ·实验方案(技术路线与实验内容) | 第59-61页 |
| ·好氧发酵琥珀酸及PHB实验技术路线 | 第59-60页 |
| ·实验内容 | 第60-61页 |
| ·琥珀酸脱氢酶基因sdhA的敲除 | 第60页 |
| ·工程菌株QZ1111发酵葡萄糖和木糖生产琥珀酸 | 第60页 |
| ·ppc基因的过量表达对琥珀酸产量的影响 | 第60-61页 |
| ·琥珀酸和PHB的联产 | 第61页 |
| ·实验材料及方法 | 第61-62页 |
| ·实验相关菌株及质粒 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62页 |
| ·sdhA基因的敲除 | 第62页 |
| ·ppc基因的克隆 | 第62页 |
| ·NADH及NADPH浓度测定 | 第62页 |
| ·相关代谢产物的检测 | 第62页 |
| ·实验结果 | 第62-68页 |
| ·sdhA基因的敲除 | 第63页 |
| ·ppc基因表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·工程菌株QZ1111的生长曲线 | 第64页 |
| ·过量表达ppc基因对琥珀酸的影响 | 第64-65页 |
| ·工程菌株QZ1111补料发酵琥珀酸 | 第65-66页 |
| ·工程菌株发酵木糖生产琥珀酸 | 第66-67页 |
| ·分批发酵琥珀酸和PHB | 第67-68页 |
| ·本章结论 | 第68-69页 |
| 第五章 生物炼制发酵生产琥珀酸和PHA | 第69-79页 |
| ·引言 | 第69-70页 |
| ·实验方案(技术路线与实验内容) | 第70-71页 |
| ·实验技术路线 | 第70页 |
| ·实验内容 | 第70-71页 |
| ·sdhA基因的敲除对琥珀酸产量的影响 | 第70-71页 |
| ·pta的敲除对琥珀酸产量的影响 | 第71页 |
| ·琥珀酸和PHA的联产 | 第71页 |
| ·实验材料及方法 | 第71-74页 |
| ·实验相关菌株、质粒以及引物 | 第71-72页 |
| ·实验方法 | 第72-74页 |
| ·P1噬菌体转导 | 第72-73页 |
| ·pta基因的敲除 | 第73页 |
| ·phaC1基因表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·琥珀酸和PHA发酵条件 | 第74页 |
| ·琥珀酸及PHA检测 | 第74页 |
| ·实验结果 | 第74-78页 |
| ·琥珀酸生产菌株的构建 | 第74-75页 |
| ·发酵甘油积累琥珀酸 | 第75-76页 |
| ·phaC1表达载体的构建 | 第76页 |
| ·联产琥珀酸和PHA工程菌株的构建 | 第76-77页 |
| ·补料发酵联产琥珀酸和PHA | 第77-78页 |
| ·本章结论 | 第78-79页 |
| 第六章 产5-氨基乙酰丙酸的大肠杆菌工程菌株的构建及优化 | 第79-109页 |
| ·引言 | 第79-82页 |
| ·实验方案(技术路线与实验内容) | 第82-85页 |
| ·实验技术路线 | 第82-83页 |
| ·实验内容 | 第83-85页 |
| ·大肠杆菌ALA C5相关基因的过量表达对ALA产量的影响 | 第83页 |
| ·gltX的表达对C5途径相关基因的调控 | 第83页 |
| ·hemA(C5)基因的突变及过量表达对ALA产量的影响 | 第83页 |
| ·hemA及hemA~M的表达量的比较分析 | 第83页 |
| ·相关多基因的共表达对ALA产量的影响 | 第83-84页 |
| ·Fe~(2+)对ALA产量的影响 | 第84页 |
| ·rhtA基因的过量表达对ALA产量的影响 | 第84页 |
| ·sucA基因的敲除对ALA产量的影响 | 第84页 |
| ·udhA基因的过量表达对ALA产量的影响 | 第84页 |
| ·hemB的启动子分析 | 第84页 |
| ·可控降解HemB及sspB基因的缺失对ALA的影响 | 第84-85页 |
| ·实验材料及方法 | 第85-94页 |
| ·实验相关菌株及质粒 | 第85-87页 |
| ·培养基 | 第87-88页 |
| ·实验方法 | 第88-94页 |
| ·ALA C5相关基因表达载体构建 | 第88页 |
| ·sucA基因的敲除 | 第88页 |
| ·实时定量PCR | 第88-91页 |
| ·蛋白表达的检测 | 第91-93页 |
| ·ssrA标签的添加及sspB基因的敲除 | 第93页 |
| ·ALA发酵条件 | 第93-94页 |
| ·ALA的分析方法 | 第94页 |
| ·实验结果 | 第94-107页 |
| ·ALA标准曲线的测定 | 第94-95页 |
| ·本研究构建质粒图谱 | 第95-96页 |
| ·基因gltX、hemA和hemL的表达对ALA产量的影响 | 第96-97页 |
| ·过量表达外源修饰基因hemA对ALA产量的影响 | 第97-99页 |
| ·共表达hemA~M和hemL对ALA产量的协同作用 | 第99-100页 |
| ·GluRS上调hemB基因的表达 | 第100-101页 |
| ·过量表达udhA对ALA产量的影响 | 第101-102页 |
| ·sucA基因的敲除对ALA产量的影响 | 第102页 |
| ·膜蛋白RhtA过量表达加速ALA的胞外运输 | 第102-103页 |
| ·Fe~(2+)的添加有害于ALA的积累 | 第103-104页 |
| ·ALA的分批发酵 | 第104-105页 |
| ·hemB基因启动子的分析 | 第105-106页 |
| ·HemB蛋白的可控降解有害于ALA的积累 | 第106页 |
| ·sspB基因的缺失恢复ALA的产量 | 第106-107页 |
| ·本章结论 | 第107-109页 |
| 全文总结 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第123-125页 |
| 攻读博士学位期间获得奖励与荣誉 | 第125-127页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第127-128页 |
| 附录 | 第128-140页 |
