| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 中英文缩写对照表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1.1 pH稳态的意义 | 第14-19页 |
| 1.1.1 细菌细胞pH稳态调节 | 第14-15页 |
| 1.1.2 哺乳动物细胞pH稳态调节 | 第15-16页 |
| 1.1.3 植物细胞pH稳态调节 | 第16-18页 |
| 1.1.4 植物硝酸盐转运蛋白NRT1.1蛋白结构与pH稳态的关系 | 第18-19页 |
| 1.2 水稻硝酸盐吸收转运蛋白研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2.1 水稻硝酸盐吸收转运蛋白 | 第19页 |
| 1.2.2 水稻高亲和硝酸盐转运蛋白OsNR2.3 | 第19-20页 |
| 1.2.3 水稻高亲和硝酸盐转运蛋白OsNRT2.3功能研究 | 第20-21页 |
| 1.3 基因融合技术在蛋白结构研究中的应用 | 第21-22页 |
| 1.4 技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 OsNRT2.3a/b蛋白结构的生物信息学分析 | 第24-28页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第24页 |
| 2.2.1 OsNRT2.3a/b蛋白拓扑结构预测 | 第24页 |
| 2.2.2 OsNRT2.3a/b蛋白三级结构预测 | 第24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-28页 |
| 2.3.1 OsNRT2.3a/b蛋白二级结构预测结果分析 | 第24-26页 |
| 2.3.2 OsNRT2.3a/b蛋白三级结构预测结果分析 | 第26-28页 |
| 第三章 水稻OsNRT2.3a/b原始基因原核系统表达 | 第28-38页 |
| 3.1 引言 | 第28页 |
| 3.2 实验材料 | 第28-30页 |
| 3.2.1 基因片段所在质粒 | 第28页 |
| 3.2.2 LB培养基 | 第28页 |
| 3.2.3 表达质粒及宿主菌 | 第28页 |
| 3.2.4 限制性内切酶和试剂 | 第28-29页 |
| 3.2.5 主要仪器 | 第29-30页 |
| 3.3 实验方法 | 第30-34页 |
| 3.3.1 OsNRT2.3a/b基因克隆片段的选取 | 第30-31页 |
| 3.3.2 OsNRT2.3a/b基因重组原核表达质粒的构建及测序鉴定 | 第31-33页 |
| 3.3.3 大肠杆菌中重组质粒的诱导表达 | 第33-34页 |
| 3.4 结果与分析 | 第34-36页 |
| 3.4.1 目的基因克隆图谱 | 第34页 |
| 3.4.2 重组质粒的酶切验证图谱 | 第34-35页 |
| 3.4.3 重组阳性质粒的测序结果 | 第35页 |
| 3.4.4 OsNRT2.3a/b融合GFP表达后检测 | 第35-36页 |
| 3.4.5 OsNRT2.3a/b和PhoA融合蛋白的酶活检测 | 第36页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 水稻OsNRT23a/b优化基因原核系统表达 | 第38-56页 |
| 4.1 引言 | 第38-40页 |
| 4.2 实验材料 | 第40-43页 |
| 4.2.1 原核优化基因 | 第40页 |
| 4.2.2 LB培养基 | 第40页 |
| 4.2.3 表达质粒及宿主菌 | 第40页 |
| 4.2.4 限制性内切酶和试剂 | 第40页 |
| 4.2.5 主要仪器 | 第40-43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-49页 |
| 4.3.1 OsNRT2.3a/b基因编码序列原核优化 | 第43页 |
| 4.3.2 OsNRT2.3a/b原核优化基因克隆片段的选取 | 第43页 |
| 4.3.3 OsNRT2.3a/b原核优化基因表达质粒的构建及测序鉴定 | 第43-45页 |
| 4.3.4 报告基因GFP/PhoA融合表达质粒的构建及测序鉴定 | 第45-48页 |
| 4.3.5 大肠杆菌中重组质粒的诱导表达 | 第48页 |
| 4.3.6 大肠杆菌中重组质粒总蛋白的提取及Wsern blot | 第48-49页 |
| 4.4 结果与分析 | 第49-53页 |
| 4.4.1 目的基因克隆图谱 | 第49页 |
| 4.4.2 重组阳性质粒的测序结果 | 第49页 |
| 4.4.3 OsNRT2.3a/b融合GFP表达后检测 | 第49-51页 |
| 4.4.4 OsNRT2.3a/b和PhoA融合蛋白的酶活检测 | 第51-52页 |
| 4.4.5 Western Blot结果分析 | 第52-53页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第53-56页 |
| 第五章 OsNRT2.3a/b在水稻原生质体真核系统中的表达 | 第56-70页 |
| 5.1 引言 | 第56页 |
| 5.2 实验材料 | 第56-58页 |
| 5.2.1 OsNRT2.3a/b目的基因及其阳性、阴性对照基因 | 第56-57页 |
| 5.2.2 LB培养基 | 第57页 |
| 5.2.3 表达质粒及宿主细胞 | 第57页 |
| 5.2.4 限制性内切酶和试剂 | 第57页 |
| 5.2.5 主要仪器 | 第57-58页 |
| 5.3 实验方法 | 第58-65页 |
| 5.3.1 目的基因特殊位点融合His-tag的载体构建及测序鉴定 | 第58-60页 |
| 5.3.2 pMD19-THis-tag后续载体构建及测序鉴定 | 第60-62页 |
| 5.3.3 pRCS2原生质体表达质粒的构建及测序鉴定 | 第62-64页 |
| 5.3.4 pRCS2重组质粒转化水稻原生质体 | 第64-65页 |
| 5.3.5 通透处理及抗体孵育 | 第65页 |
| 5.3.6 流式细胞仪上样分析 | 第65页 |
| 5.4 结果与分析 | 第65-68页 |
| 5.4.1 重组阳性质粒的测序结果 | 第65-66页 |
| 5.4.2 流式细胞仪检测结果分析 | 第66-68页 |
| 5.5 结果与讨论 | 第68-70页 |
| 全文结论 | 第70-72页 |
| 创新点 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 附录 | 第78-94页 |
| 论文发表 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
