| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-32页 |
| ·Z-DNA的结构与功能 | 第11-18页 |
| ·Z-DNA的结构特征 | 第12-13页 |
| ·Z-DNA与B-DNA间的junction结构 | 第13-14页 |
| ·Z-DNA的形成及功能的推测 | 第14-18页 |
| ·Z-DNA的形成及其稳定因素 | 第14-16页 |
| ·Z-DNA的功能 | 第16-18页 |
| ·Z-DNA的检测 | 第18-23页 |
| ·单晶体X射线衍射法(Single-crystal X-ray) | 第18-19页 |
| ·扫描隧道显微技术(Scanning Tunneling Microscopy,STM) | 第19页 |
| ·核磁共振技术(Nuclear Magnetic Resonance,NMR) | 第19-20页 |
| ·圆二色谱(Circular Dichroism,CD) | 第20-21页 |
| ·基于SPR(Surface Plasmon Resonance)的BIAcore技术 | 第21-22页 |
| ·琼脂糖凝胶双向电泳 | 第22-23页 |
| ·甲基化抑制实验 | 第23页 |
| ·抗Z-DNA抗体 | 第23页 |
| ·Z-DNA结合蛋白 | 第23-31页 |
| ·ADAR1 | 第25-26页 |
| ·DLM-1(ZBP-1) | 第26页 |
| ·E3L | 第26-28页 |
| ·PKZ | 第28-31页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 材料和方法 | 第32-52页 |
| ·仪器与试剂 | 第32-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第32页 |
| ·主要试剂、试剂盒 | 第32-33页 |
| ·载体和菌株 | 第33-34页 |
| ·引物 | 第34-36页 |
| ·相关软件 | 第36页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-52页 |
| ·Z-DNA | 第37-38页 |
| ·pMD-18T/d(GC)n、pMD-18T/d(TA)n等重组质粒的构建 | 第37页 |
| ·pMD-18T/d(GC)n等重组质粒的Z-形构象分析 | 第37-38页 |
| ·鲫鱼CaPKZ Zα结构域与Z-DNA的亲和性分析 | 第38-46页 |
| ·pET-22b(+)/Zα表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·定点突变分析P_(Zα)与Z-DNA结合的关键位点 | 第40-43页 |
| ·原核表达 | 第43页 |
| ·表达产物的纯化 | 第43-44页 |
| ·P_(Zα)蛋白质浓度的测定 | 第44-45页 |
| ·二聚化分析 | 第45页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第45-46页 |
| ·草鱼CiPKZ全长cDNA及其组织表达特性分析 | 第46-52页 |
| ·RNA抽提和SMART cDNA的合成 | 第46-48页 |
| ·CiPKZ全长cDNA的克隆 | 第48页 |
| ·草鱼CiPKZ启动子序列克隆 | 第48-49页 |
| ·RT-PCR分析 | 第49-52页 |
| 第三章 实验结果 | 第52-70页 |
| ·Z-DNA | 第52-55页 |
| ·pMD-18T/d(GC)n、pMD-18T/d(TA)n等重组质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·PCR筛选阳性克隆 | 第52页 |
| ·抽提pMD-18T/d(GC)n、pMD-18T/d(TA)n等重组质粒 | 第52-53页 |
| ·pMD-18T/d(GC)n重组质粒的Z-形构象分析 | 第53-55页 |
| ·甲基化抑制试验 | 第53-54页 |
| ·pMD-18T/d(GC)n重组质粒与抗Z-DNA抗体结合实验 | 第54页 |
| ·pMD-18T/d(TA)n、pMD-18T/d(non-GC-repeat)n重组质粒与抗Z-DNA抗体结合实验 | 第54-55页 |
| ·鲫鱼CaPKZ Za结构域与Z-DNA的亲和性分析 | 第55-62页 |
| ·pET-22b(+)/Zα表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·PCR筛选重组质粒的阳性克隆 | 第55-56页 |
| ·重组质粒抽提 | 第56页 |
| ·定点突变分析P_(Zα)与Z-DNA结合的关键位点 | 第56-57页 |
| ·PCR定点突变后产物 | 第56-57页 |
| ·点突变型质粒抽提 | 第57页 |
| ·原核表达及产物纯化 | 第57-58页 |
| ·P_(Zα1Zα2)和P_(Zα1zα1)、P_(Zα2Zα2)表达多肽 | 第57-58页 |
| ·9个点突变型表达多肽 | 第58页 |
| ·二聚化分析 | 第58-59页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第59-62页 |
| ·P_(Zα1Zα2)和P_(Zα1Zα1)、P_(Zα2Zα2)与pMD-18T/d(GC)_n重组质粒的亲和性 | 第59-60页 |
| ·P_(Zα1Zα2)与pMD-18T/d(TA)n重组质粒的亲和性分析 | 第60-61页 |
| ·P_(Zα1Zα2)与pMD-18T/d(non-GC-repeat)n重组质粒的亲和性分析 | 第61页 |
| ·点突变型P_(Zα)与pMD-18T/d(GC)6、pMD-18T/d(TA)6重组质粒的亲和性分析 | 第61-62页 |
| ·草鱼CiPKZ序列及其组织表达特性分析 | 第62-70页 |
| ·CiPKZ全长cDNA的克隆及序列特征 | 第62-66页 |
| ·CiPKZ基因序列的克隆 | 第62-63页 |
| ·CiPKZ基因及推导的氨基酸序列 | 第63-65页 |
| ·草鱼CiPKZ与鲫鱼CaPKZ序列比对 | 第65-66页 |
| ·CiPKZ基因启动子克隆及其序列分析 | 第66-68页 |
| ·草鱼基因组DNA | 第66-67页 |
| ·基因步移法获得草鱼PKZ启动子序列 | 第67页 |
| ·草鱼CiPKZ启动子序列分析 | 第67-68页 |
| ·CiPKZ基因的组织特异性表达 | 第68-70页 |
| 第四章 讨论 | 第70-85页 |
| ·eIF2α激酶与鱼类PKZ | 第70-76页 |
| ·HRI | 第71-72页 |
| ·PERK/PEK | 第72页 |
| ·PKR | 第72-74页 |
| ·GCN2 | 第74-75页 |
| ·鱼类PKZ | 第75-76页 |
| ·鱼类PKZ功能的初探 | 第76-83页 |
| ·表达特性 | 第76页 |
| ·二聚化以及可能的激活机制 | 第76-77页 |
| ·鲫鱼CaPKZ Zα功能的初步分析 | 第77-82页 |
| ·Z-DNA体外模拟及其构象分析 | 第77-78页 |
| ·原核表达载体选择、构建及其表达多肽的纯化 | 第78-79页 |
| ·P_(Zα)与重组质粒的亲和性分析 | 第79-82页 |
| ·草鱼CiPKZ基因序列特征 | 第82-83页 |
| ·展望 | 第83-85页 |
| 第五章 小结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 附录1:缩略语 | 第99-101页 |
| 附录2:论文列表 | 第101页 |
