| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略词 | 第16-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-33页 |
| 1.1 叶酸简介 | 第18-21页 |
| 1.1.1 叶酸的结构与性质 | 第18-19页 |
| 1.1.2 叶酸的生理功能 | 第19-20页 |
| 1.1.3 叶酸与疾病 | 第20-21页 |
| 1.2 乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)概述 | 第21-22页 |
| 1.2.1 乳酸菌的益生特性 | 第21-22页 |
| 1.2.2 产叶酸的乳酸菌研究现状 | 第22页 |
| 1.3 叶酸的合成方法与生物利用度 | 第22-25页 |
| 1.3.1 化学合成法 | 第23页 |
| 1.3.2 生物方法 | 第23-24页 |
| 1.3.3 叶酸代谢与生物利用度 | 第24-25页 |
| 1.4 叶酸的合成代谢 | 第25-30页 |
| 1.4.1 叶酸生物合成途径 | 第25-27页 |
| 1.4.2 叶酸生物合成途径关键基因研究进展 | 第27-28页 |
| 1.4.3 叶酸生物合成的基因工程研究进展 | 第28-30页 |
| 1.5 folP和folE基因产物GTP环化水解酶I及二氢蝶酸合酶研究进展 | 第30-31页 |
| 1.5.1 GTP环化水解酶I | 第30页 |
| 1.5.2 二氢蝶酸合酶 | 第30-31页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第31页 |
| 1.7 研究内容 | 第31-32页 |
| 1.8 实验路线 | 第32-33页 |
| 第二章 L.plantarum YM-4-3菌株的folE、folKE、folP基因敲除菌株构建 | 第33-70页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-41页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第34页 |
| 2.2.2 实验质粒及引物 | 第34-36页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第36页 |
| 2.2.4 实验试剂 | 第36-38页 |
| 2.2.5 培养基及试剂配制 | 第38-41页 |
| 2.3 实验方法 | 第41-59页 |
| 2.3.1 使用本地blast软件确定folE、folKE、folP基因序列 | 第41页 |
| 2.3.2 folE、folKE、folP基因同源臂的克隆与测序 | 第41-45页 |
| 2.3.3 质粒pFED760的转化与提取 | 第45-46页 |
| 2.3.4 目的片段与载体的酶切与连接 | 第46-47页 |
| 2.3.5 L.plantarum YM-4-3菌株电转化感受态细胞的制备及电转方法 | 第47-49页 |
| 2.3.6 pFED760温度敏感型质粒的基因敲除原理 | 第49-51页 |
| 2.3.7 L.plantarum YM-4-3菌株中folE、folKE、folP基因敲除 | 第51-53页 |
| 2.3.8 folE、folKE、folP基因敲除菌株的分子生物学验证 | 第53-59页 |
| 2.4 实验结果 | 第59-67页 |
| 2.4.1 L.plantarum YM-4-3菌株中folE、folKE、folP基因位置及序列确定 | 第59-60页 |
| 2.4.2 敲除载体构建验证 | 第60页 |
| 2.4.3 敲除载体成功导入YM-4-3感受态细胞 | 第60-61页 |
| 2.4.4 敲除载体整合进基因组验证 | 第61-62页 |
| 2.4.5 L.plantarum YM-4-3菌株中folE、folKE、folP基因敲除的PCR验证 | 第62-65页 |
| 2.4.6 L.plantarum YM-4-3菌株中folE、folKE、folP基因敲除的分子杂交(southern blot)验证 | 第65-66页 |
| 2.4.7 L.plantarum YM-4-3菌株中folE、folKE、folP基因敲除RNA水平验证 | 第66-67页 |
| 2.5 讨论 | 第67-69页 |
| 2.6 小结 | 第69-70页 |
| 第三章 L.plantarum YM-4-3菌株的folE、folKE、folP基因敲除株的性状鉴定及叶酸产量测定 | 第70-85页 |
| 3.1 引言 | 第70-71页 |
| 3.2 实验材料 | 第71页 |
| 3.2.1 菌株 | 第71页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第71页 |
| 3.2.3 实验试剂与试剂配制 | 第71页 |
| 3.3 实验方法 | 第71-74页 |
| 3.3.1 ΔfolE、ΔfolKE和ΔfolP菌株的宏观生长状态观察 | 第71-72页 |
| 3.3.2 ΔfolE、ΔfolKE和ΔfolP菌株的细胞形态学观察 | 第72页 |
| 3.3.3 ΔfolE、ΔfolKE和ΔfolP菌株的干重测定 | 第72页 |
| 3.3.4 ΔfolE、ΔfolKE和ΔfolP菌株的动态生长监测 | 第72页 |
| 3.3.5 ΔfolE、ΔfolKE和ΔfolP菌株的叶酸产量测定 | 第72-74页 |
| 3.4 实验结果 | 第74-82页 |
| 3.4.1 ΔfolE、ΔfolKE和ΔfolP菌株的宏观生长状态观察 | 第74页 |
| 3.4.2 ΔfolE、ΔfolKE和ΔfolP菌株的细胞形态学观察 | 第74-76页 |
| 3.4.3 ΔfolE、ΔfolKE和ΔfolP菌株的干重测定 | 第76-77页 |
| 3.4.4 ΔfolE、ΔfolKE和ΔfolP菌株的动态生长监测 | 第77-79页 |
| 3.4.5 ΔfolE、ΔfolKE和ΔfolP菌株的叶酸产量测定 | 第79-82页 |
| 3.5 讨论 | 第82-84页 |
| 3.6 小结 | 第84-85页 |
| 第四章 L.plantarumYM-4-3菌株的folE、folKE和folP基因的回补及过表达菌株构建.. | 第85-97页 |
| 4.1 引言 | 第85页 |
| 4.2 实验材料 | 第85-86页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第85-86页 |
| 4.2.2 实验质粒及引物 | 第86页 |
| 4.2.3 实验仪器与试剂 | 第86页 |
| 4.3 实验方法 | 第86-89页 |
| 4.3.1 ΔfolE、ΔfolKE、ΔfolP菌株的回补片段及表达片段扩增与测序 | 第86-87页 |
| 4.3.2 回补(过表达)载体构建与验证 | 第87-88页 |
| 4.3.3 回补菌株和过表达菌株的筛选 | 第88页 |
| 4.3.4 荧光定量PCR | 第88-89页 |
| 4.3.5 叶酸测定 | 第89页 |
| 4.4 实验结果 | 第89-95页 |
| 4.4.1 回补载体构建成功 | 第89-90页 |
| 4.4.2 表达载体构建成功 | 第90-91页 |
| 4.4.3 回补菌株H-folP和过表达菌株B-folP构建成功 | 第91页 |
| 4.4.4 基因表达水平检测 | 第91-94页 |
| 4.4.5 叶酸测定结果 | 第94-95页 |
| 4.5 讨论 | 第95页 |
| 4.6 小结 | 第95-97页 |
| 第五章 总结与展望 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 附录 硕士期间已发表文章 | 第107页 |
