| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词对照表 | 第6-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-20页 |
| 1 结直肠癌介绍 | 第11-13页 |
| 1.1 结直肠癌发生和死亡现状 | 第11-12页 |
| 1.2 结直肠癌诊断和治疗现状 | 第12-13页 |
| 2 线粒体介绍 | 第13-16页 |
| 2.1 线粒体基因结构 | 第13页 |
| 2.2 线粒体氧化呼吸链 | 第13-14页 |
| 2.3 线粒体基因与功能 | 第14-16页 |
| 3 表观遗传学与DNA甲基化的关系 | 第16-17页 |
| 4 结直肠癌细胞与线粒体DNA甲基化 | 第17-19页 |
| 5 研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章. 材料与方法 | 第20-35页 |
| 1 实验材料 | 第20-22页 |
| 1.1 细胞株 | 第20页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第20-21页 |
| 1.2.1 细胞培养相关 | 第20页 |
| 1.2.2 试剂及抗体 | 第20-21页 |
| 1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2 结直肠癌组织甲基化水平检测 | 第22-27页 |
| 2.1 结直肠癌病理组织总DNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2 亚硫酸盐修饰基因组DNA | 第23-24页 |
| 2.3 PCR扩增目的片段 | 第24-26页 |
| 2.4 纯化后测序 | 第26-27页 |
| 3 细胞水平检测实验方法 | 第27-35页 |
| 3.1 细胞培养(HCT116、FHC) | 第27-28页 |
| 3.1.1 细胞复苏 | 第27页 |
| 3.1.2 细胞传代 | 第27-28页 |
| 3.1.3 细胞冻存 | 第28页 |
| 3.2 细胞甲基化水平检测实验方法 | 第28页 |
| 3.2.1 细胞总DNA提取 | 第28页 |
| 3.2.2 修饰扩增纯化测序 | 第28页 |
| 3.3 细胞去甲基化水平检测实验方法 | 第28-35页 |
| 3.3.1 细胞铺板 | 第28-29页 |
| 3.3.2 Western Blot | 第29-32页 |
| 3.3.2.1 细胞总蛋白提取 | 第29页 |
| 3.3.2.2 BCA试剂盒测定蛋白浓度 | 第29页 |
| 3.3.2.3 蛋白样品上样量 | 第29-30页 |
| 3.3.2.4 SDS-PAGE配胶 | 第30-31页 |
| 3.3.2.5 蛋白样品上样跑胶 | 第31页 |
| 3.3.2.6 转膜 | 第31-32页 |
| 3.3.2.7 封闭、孵抗 | 第32页 |
| 3.3.2.8 曝光检测 | 第32页 |
| 3.3.3 细胞线粒体ATP检测实验 | 第32-34页 |
| 3.3.3.1 提取细胞线粒体 | 第32-33页 |
| 3.3.3.2 细胞线粒体蛋白Western blot | 第33页 |
| 3.3.3.3 配制ATP稀释液 | 第33页 |
| 3.3.3.4 测定ATP | 第33-34页 |
| 3.3.4 MTT法绘制生长曲线 | 第34-35页 |
| 3.3.4.1 细胞铺板 | 第34页 |
| 3.3.4.2 检测细胞增殖活力 | 第34-35页 |
| 第三章. 结果与分析 | 第35-50页 |
| 1 结直肠癌病理组织线粒体基因甲基化检测结果 | 第35-41页 |
| 1.1 CRC病理组织中片段PCR对比结果 | 第35-36页 |
| 1.2 CRC病理组织中亚硫酸氢盐修饰测序对比结果 | 第36-41页 |
| 2 结直肠癌细胞株差异性检测结果 | 第41-50页 |
| 2.1 结直肠癌细胞株基因片段PCR对比结果 | 第41-42页 |
| 2.2 细胞去甲基化对比结果 | 第42-44页 |
| 2.3 细胞株MTT检测结果 | 第44-45页 |
| 2.4 5-Aza-dC对细胞线粒体产能的影响 | 第45-46页 |
| 2.5 细胞蛋白表达量Western Blot检测对比结果 | 第46-50页 |
| 第四章. 讨论 | 第50-53页 |
| 附录 | 第53-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
