| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第15-17页 |
| 引言 | 第17-23页 |
| 参考文献 | 第19-23页 |
| 第一部分 文献综述 | 第23-45页 |
| 第一章 CRISPR/Cas9技术在家畜基因修饰中的研究进展 | 第23-35页 |
| 1 CRISPR/Cas9技术简介 | 第23-24页 |
| 2 Cas9蛋白结构与技术原理 | 第24-27页 |
| 2.1 CRISPR/Cas9系统的结构 | 第24-25页 |
| 2.2 CRISPR/Cas9技术的技术原理 | 第25-27页 |
| 3 CRISPR/Cas9技术在家畜基因编辑中的应用 | 第27-29页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9技术在家畜生产性能基因编辑中的应用 | 第27页 |
| 3.2 CRISPR/Cas9技术在家畜抗病育种中的应用 | 第27-28页 |
| 3.3 CRISPR/Cas9技术在家畜疾病模型生产中的应用 | 第28页 |
| 3.4 CRISPR/Cas9技术在家畜乳品质改进中的应用 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-35页 |
| 第二章 乳铁蛋白生物学特性及家畜乳腺表达hLF的研究进展 | 第35-45页 |
| 1 分布与含量 | 第35页 |
| 2 结构与特性 | 第35-36页 |
| 3 生物学功能 | 第36-38页 |
| 3.1 促进铁元素的吸收 | 第36页 |
| 3.2 抗菌活性 | 第36-37页 |
| 3.3 抗病毒作用 | 第37-38页 |
| 3.4 抗氧化作用 | 第38页 |
| 3.5 免疫调节作用 | 第38页 |
| 3.6 抗肿瘤作用 | 第38页 |
| 4 转基因家畜乳腺表达重组人乳铁蛋白研究进展 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 第二部分 试验研究 | 第45-109页 |
| 第三章 不同转染方法对CRISPR/Cas9介导的山羊BLG基因编辑效率的影响 | 第45-67页 |
| 1 材料与方法 | 第47-55页 |
| 1.1 试验材料 | 第47页 |
| 1.2 主要仪器 | 第47-48页 |
| 1.3 主要试剂 | 第48页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第48-49页 |
| 1.5 试验方法 | 第49-55页 |
| 1.6 数据统计与分析 | 第55页 |
| 2 结果 | 第55-63页 |
| 2.1 sgRNA的设计及Cas9-sgRNA打靶质粒构建 | 第55-56页 |
| 2.2 BLG打靶载体pBHA-hLF-NIE的构建及其鉴定 | 第56-60页 |
| 2.3 不同转染方法在山羊成纤维细胞中转染效率的影响 | 第60-62页 |
| 2.4 不同转染方法对CRISPR/Cas9介导的BLG基因编辑效率的影响 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 第四章 RS-1对CRISPR/Cas9介导的山羊BLG位点敲入hLF效率的影响 | 第67-79页 |
| 1 材料与方法 | 第68-70页 |
| 1.1 试验材料 | 第68页 |
| 1.2 主要仪器 | 第68页 |
| 1.3 主要试剂 | 第68页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第68页 |
| 1.5 试验方法 | 第68-70页 |
| 1.6 数据统计与分析 | 第70页 |
| 2 结果 | 第70-74页 |
| 2.1 不同浓度RS-1对CRISPR/Cas9介导的同源重组效率的影响 | 第70-72页 |
| 2.2 不同浓度RS-1对CRISPR/Cas9介导的hLF敲入阳性克隆率的影响 | 第72-74页 |
| 3 讨论 | 第74-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 第五章 CRISPR/Cas9介导的BLG基因敲除和hLF基因敲入山羊的生产与鉴定 | 第79-97页 |
| 1 材料与方法 | 第80-85页 |
| 1.1 试验材料 | 第80页 |
| 1.2 主要仪器 | 第80-81页 |
| 1.3 主要试剂 | 第81页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第81页 |
| 1.5 试验方法 | 第81-85页 |
| 1.6 数据统计与分析 | 第85页 |
| 2 结果 | 第85-91页 |
| 2.1 Cas9 mRNA和sgRNA体外转录与回收 | 第85-86页 |
| 2.2 山羊单细胞胚胎显微注射和后代基因型鉴定结果 | 第86-88页 |
| 2.3 打靶阳性个体突变类型分析 | 第88-90页 |
| 2.4 打靶阳性个体脱靶分析 | 第90页 |
| 2.5 打靶个体各器官编辑情况 | 第90-91页 |
| 3 讨论 | 第91-94页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9系统介导的基因敲除山羊生产效率比较 | 第91-92页 |
| 3.2 CRISPR/Cas9系统介导的基因敲入山羊生产效率比较 | 第92-93页 |
| 3.3 CRISPR/Cas9脱靶活性分析 | 第93页 |
| 3.4 BLG基因成功编辑个体嵌合分析 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-97页 |
| 第六章 BLG基因敲除对泌乳期山羊乳品质及乳蛋白基因表达的影响 | 第97-109页 |
| 1 材料与方法 | 第98-102页 |
| 1.1 试验材料 | 第98页 |
| 1.2 主要仪器 | 第98页 |
| 1.3 主要试剂 | 第98-99页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第99页 |
| 1.5 试验方法 | 第99-102页 |
| 1.6 数据统计与分析 | 第102页 |
| 2 结果 | 第102-106页 |
| 2.1 BLG基因敲除山羊乳腺基因型及BLG cDNA序列的测定 | 第102-103页 |
| 2.2 BLG基因敲除对山羊乳品质的影响 | 第103-104页 |
| 2.3 BLG基因敲除对泌乳期山羊乳蛋白基因表达的影响 | 第104-105页 |
| 2.4 BLG基因敲除对山羊乳清蛋白表达的影响 | 第105页 |
| 2.5 BLG基因敲除对山羊乳汁中BLG蛋白表达的影响 | 第105-106页 |
| 3 讨论 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-109页 |
| 全文结论 | 第109-111页 |
| 创新点 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第115页 |
