| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第9-17页 |
| 1.1 昆虫的嗅觉 | 第9页 |
| 1.2 昆虫的嗅觉机制 | 第9页 |
| 1.3 植物挥发物和昆虫信息素 | 第9-10页 |
| 1.3.1 植物挥发物 | 第10页 |
| 1.3.2 昆虫信息素 | 第10页 |
| 1.4 气味结合蛋白(OBPs)的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.4.1 OBPs的发现 | 第10页 |
| 1.4.2 OBPs的特征 | 第10-11页 |
| 1.4.3 OBPs的分类 | 第11页 |
| 1.4.4 OBPs的生理功能 | 第11-13页 |
| 1.4.5 OBPs在其他组织器官中的表达 | 第13页 |
| 1.4.6 OBPs与配体的结合特性 | 第13-14页 |
| 1.4.7 OBPs与配体结合的研究方法 | 第14页 |
| 1.5 其他嗅觉相关蛋白 | 第14-15页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第15-17页 |
| 2 莲草直胸跳甲OBPs的基因克隆、原核表达及纯化分析 | 第17-32页 |
| 2.1 材料和方法 | 第17-19页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第17页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.4 所用载体 | 第18页 |
| 2.1.5 所配试剂 | 第18-19页 |
| 2.2 试验方法 | 第19-23页 |
| 2.2.1 莲草直胸跳甲总RNA的提取 | 第19页 |
| 2.2.2 反转录cDNA的合成 | 第19-20页 |
| 2.2.3 目的序列的PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.4 PCR产物胶回收 | 第21-22页 |
| 2.2.5 克隆型载体的构建 | 第22页 |
| 2.2.6 转化 | 第22页 |
| 2.2.7 阳性重组子的鉴定、测序和保存 | 第22-23页 |
| 2.3 莲草直胸跳甲OBPs生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.4 莲草直胸跳甲OBPs的表达模式分析 | 第23-25页 |
| 2.4.1 供试昆虫及组织收集 | 第23-24页 |
| 2.4.2 莲草直胸跳甲各组织总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.4.3 cDNA第一条链的合成 | 第24页 |
| 2.4.4 引物设计 | 第24页 |
| 2.4.5 实时荧光定量PCR反应 | 第24-25页 |
| 2.5 莲草直胸跳甲OBPs原核表达载体的构建 | 第25-29页 |
| 2.5.1 pEASY(?)- Blunt Cloning Vector质粒提取 | 第25页 |
| 2.5.2 表达引物的设计 | 第25-26页 |
| 2.5.3 表达序列PCR | 第26页 |
| 2.5.4 PCR产物回收 | 第26-27页 |
| 2.5.5 转化 | 第27页 |
| 2.5.6 pET28a(+)质粒提取 | 第27页 |
| 2.5.7 pET28a(+)双酶切 | 第27-28页 |
| 2.5.8 无缝克隆 | 第28页 |
| 2.5.9 转化 | 第28页 |
| 2.5.10 阳性克隆鉴定 | 第28-29页 |
| 2.6 莲草直胸跳甲OBPs的表达、纯化 | 第29-32页 |
| 2.6.1 IPTG诱导蛋白表达 | 第29页 |
| 2.6.2 SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第29-30页 |
| 2.6.3 原核表达蛋白的纯化 | 第30-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-47页 |
| 3.1 目的序列扩增结果 | 第32页 |
| 3.2 目的序列克隆载体构建结果 | 第32-34页 |
| 3.3 莲草直胸跳甲OBPs的生物信息学分析结果 | 第34-40页 |
| 3.3.1 莲草直胸跳甲OBPs的理化性质分析 | 第34-35页 |
| 3.3.2 莲草直胸跳甲OBPs的多序列比对 | 第35-36页 |
| 3.3.3 莲草直胸跳甲OBPs的进化树分析 | 第36-40页 |
| 3.4 表达模式分析 | 第40-41页 |
| 3.5 目的序列原核表达载体构建结果 | 第41-44页 |
| 3.5.1 目的序列表达引物PCR结果 | 第41-42页 |
| 3.5.2 目的序列重组表达载体的鉴定 | 第42-44页 |
| 3.6 目的蛋白原核表达及蛋白纯化结果 | 第44-47页 |
| 3.6.1 目的蛋白的诱导表达 | 第44-45页 |
| 3.6.2 AhygOBP1的蛋白经不同浓度洗杂缓冲液纯化 | 第45-46页 |
| 3.6.3 AhygOBP1的蛋白纯化 | 第46-47页 |
| 4 结论 | 第47-48页 |
| 5 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| Abstract | 第54-55页 |
| 致谢 | 第56页 |
