| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第10-18页 |
| 1.1 嗜水气单胞菌概述 | 第10页 |
| 1.2 嗜水气单胞菌流行病学 | 第10-11页 |
| 1.3 嗜水气单胞菌致病因子 | 第11-13页 |
| 1.3.1 毒力相关的分泌物质 | 第11-12页 |
| 1.3.2 致病相关的表面物质 | 第12-13页 |
| 1.4 细菌胞内存活的研究现状 | 第13-16页 |
| 1.4.1 胞内存活的研究意义 | 第13-14页 |
| 1.4.2 非胞内病原菌胞内存活的研究现状 | 第14页 |
| 1.4.3 胞内存活的机制 | 第14-15页 |
| 1.4.4 细菌胞内存活的可能影响因素 | 第15-16页 |
| 1.5 研究内容与目的 | 第16-18页 |
| 1.5.1 研究内容与路线图 | 第16-17页 |
| 1.5.2 研究目的 | 第17-18页 |
| 第2章 嗜水气单胞菌胞内存活突变库的构建、筛选和鉴定 | 第18-32页 |
| 2.1 材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 试验用菌和鱼 | 第18-19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19页 |
| 2.2 试验方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 构建突变库 | 第19-21页 |
| 2.2.2 嗜水气单胞菌胞内存活缺陷突变株的筛选 | 第21-22页 |
| 2.2.3 PCR鉴定突变株 | 第22-23页 |
| 2.2.4 Southernblot | 第23页 |
| 2.2.5 TAIL-PCR鉴定突变株DNA序列 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-30页 |
| 2.3.1 转化前后的pLOF/Km质粒提取 | 第24-25页 |
| 2.3.2 巨噬细胞的提取与分离 | 第25页 |
| 2.3.3 胞内存活突变株的筛选 | 第25-26页 |
| 2.3.4 Southernblot | 第26页 |
| 2.3.5 突变基因序列结果 | 第26-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第3章 嗜水气单胞菌HR和ILVB-1基因互补菌株的构建 | 第32-43页 |
| 3.1 材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 试验用菌和载体 | 第32-33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第33-34页 |
| 3.2 试验方法 | 第34-39页 |
| 3.2.1 TA克隆 | 第34-36页 |
| 3.2.2 重组表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.3 重组表达载体的转化 | 第37-38页 |
| 3.2.4 重组质粒的筛选和鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-41页 |
| 3.3.1 目的基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 3.3.2 重组质粒T-Hr和T-ilvB-1和pACYC184表达载体双酶切 | 第40页 |
| 3.3.3 菌液PCR验证和双酶切验证 | 第40-41页 |
| 3.3.4 Westernbloting | 第41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第4章 HR和ILVB-1基因在嗜水气单胞菌胞内存活中的功能研究 | 第43-52页 |
| 4.1 试验材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 试验菌株和鱼 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第43-44页 |
| 4.2 试验方法 | 第44-45页 |
| 4.2.1 Hr基因的生物学功能试验 | 第44-45页 |
| 4.2.2 ilvB-1基因的生物学功能试验 | 第45页 |
| 4.3 结果与分析 | 第45-50页 |
| 4.3.1 Hr基因的生物学功能试验结果 | 第45-47页 |
| 4.3.2 ilvB-1基因的生物学功能试验结果 | 第47-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第5章 小结与展望 | 第52-53页 |
| 5.1 小结 | 第52页 |
| 5.2 展望 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第63页 |
