| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第11-16页 |
| 1.1 Caspase基因在鱼类中的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2 研究的目的和意义 | 第13-14页 |
| 1.3 主要研究内容和技术路线 | 第14-16页 |
| 1.3.1 主要研究内容 | 第14-15页 |
| 1.3.2 技术路线 | 第15-16页 |
| 第2章 材料和方法 | 第16-46页 |
| 2.1 材料 | 第16-22页 |
| 2.1.1 实验动物以及菌株 | 第16页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第16-17页 |
| 2.1.3 试剂及其试剂配制 | 第17-21页 |
| 2.1.4 引物 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-46页 |
| 2.2.1 日本鳗鲡组织总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 cDNA第一条链的合成及目的基因片段的获取 | 第23-24页 |
| 2.2.3 SMART-RACE技术获取目的基因全长 | 第24-28页 |
| 2.2.4 目的基因片段的割胶纯化 | 第28页 |
| 2.2.5 DNA与质粒载体的连接 | 第28页 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.7 感受态细胞的转化及筛选 | 第29页 |
| 2.2.8 质粒插入片段的检测 | 第29-30页 |
| 2.2.9 重组质粒测序和质粒提取 | 第30-31页 |
| 2.2.10 细胞转染重组表达载体的构建 | 第31-34页 |
| 2.2.11 原核重组表达载体的构建及鉴定 | 第34-37页 |
| 2.2.12 重组蛋白的表达纯化与复性 | 第37-40页 |
| 2.2.13 利用纯化蛋白制备多克隆抗体 | 第40页 |
| 2.2.14 酶联免疫分析(间接ELISA法) | 第40-41页 |
| 2.2.15 HEK-293T细胞的复苏与培养 | 第41页 |
| 2.2.16 AjCasp6基因在细胞中的的定位 | 第41-42页 |
| 2.2.17 日本鳗鲡肝脏和脾脏细胞的培养 | 第42-43页 |
| 2.2.18 日本鳗鲡细胞系的冻存与复苏 | 第43页 |
| 2.2.19 日本鳗鲡各组织及肝脏和脾脏细胞中表达 | 第43-44页 |
| 2.2.20 目的基因的生物信息学分析 | 第44-45页 |
| 2.2.21 数据获取处理与分析 | 第45-46页 |
| 第3章 结果 | 第46-62页 |
| 3.1 日本鳗鲡各组织总RNA的提取结果 | 第46页 |
| 3.2 RACE-PCR扩增结果 | 第46-47页 |
| 3.3 AjCasp6基因序列分析 | 第47-52页 |
| 3.3.1 AjCasp6的cDNA序列分析 | 第47-48页 |
| 3.3.2 AjCasp6其他物种Caspase6多重比分析 | 第48-50页 |
| 3.3.3 AjCasp6其他物种Caspase6系统进化树分析 | 第50-51页 |
| 3.3.4 日本鳗鲡的AjCasp6的空间结构模拟 | 第51-52页 |
| 3.4 AjCasp6基因在体内和体外表达分析 | 第52-56页 |
| 3.4.1 AjCasp6基因在日本鳗鲡各组织中表达分析 | 第52-55页 |
| 3.4.2 AjCasp6基因在肝脏细胞系中的表达变化 | 第55-56页 |
| 3.5 原核表达及其检测 | 第56-58页 |
| 3.5.1 原核重组表达载体的构建结果 | 第56-57页 |
| 3.5.2 重组载体的原核表达结果及检测 | 第57-58页 |
| 3.6 AjCasp6蛋白的间接ELISA特异性实验结果 | 第58页 |
| 3.7 日本鳗鲡肝脏细胞系的原代培养和传代培养 | 第58-59页 |
| 3.7.1 日本鳗鲡肝脏细胞系的原代培养 | 第58-59页 |
| 3.7.2 日本鳗鲡肝脏细胞系的传代培养 | 第59页 |
| 3.8 不同传代比例对JEL增殖曲线的影响及群体倍增时间分析 | 第59-60页 |
| 3.9 AjCasp6基因在人类293细胞系中的转染和定位 | 第60-62页 |
| 3.9.1 AjCasp6基因在人类293细胞系中的转染 | 第60-61页 |
| 3.9.2 AjCasp6基因在人类293细胞系中的亚细胞定位 | 第61-62页 |
| 第4章 讨论 | 第62-65页 |
| 第5章 结论和展望 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 在学期间科研成果情况 | 第70页 |
