| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-17页 |
| 1.1 微管及微管蛋白抑制剂 | 第10-13页 |
| 1.2 鬼臼类微管蛋白解聚剂 | 第13-15页 |
| 1.3 鬼臼类化合物-微管蛋白相互作用的研究现状及趋势 | 第15页 |
| 1.4 本研究的主要内容和意义 | 第15-17页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第17-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-24页 |
| 2.1.1 常用试剂 | 第17-22页 |
| 2.1.2 细胞系与质粒载体 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-46页 |
| 2.2.1 猪脑中提取微管蛋白及纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.2 Stathmin家族蛋白中RB3的stathmin-like结构域(RB3-SLD)的体外重组表达与纯化 | 第25-36页 |
| 2.2.3 微管蛋白酪氨酸酶(TTL)的体外重组表达与纯化 | 第36-39页 |
| 2.2.4 微管蛋白与鬼臼类化合物1S的组装,缓冲液的置换 | 第39-40页 |
| 2.2.5 微管蛋白-1S复合物与RB3-SLD,TTL的组装 | 第40-43页 |
| 2.2.6 蛋白晶体的筛选与结构解析 | 第43-44页 |
| 2.2.7 鬼臼类化合物在体外抑制微管蛋白聚合率考察 | 第44-46页 |
| 第3章 结果与分析 | 第46-73页 |
| 3.1 猪脑中微管蛋白的提取与纯化 | 第46-47页 |
| 3.2 STATHMIN家族蛋白中RB3的STATHMIN-LIKE结构域(RB3-SLD)的体外重组表达与纯化 | 第47-54页 |
| 3.2.1 pET21b-RB3-SLD质粒构建 | 第47-51页 |
| 3.2.2 RB3-SLD蛋白的试表达结果 | 第51页 |
| 3.2.3 RB3-SLD蛋白大量表达及纯化结果 | 第51-54页 |
| 3.3 微管蛋白酪氨酸激酶TTL蛋白的体外重组表达与纯化 | 第54-58页 |
| 3.3.1 pET21b-TTL质粒构建 | 第54-56页 |
| 3.3.2 TTL蛋白的试表达和亲和层析纯化结果 | 第56-57页 |
| 3.3.3 TTL蛋白大量表达及纯化结果 | 第57-58页 |
| 3.4 微管蛋白与鬼臼类化合物1S的组装,缓冲体系的置换 | 第58-60页 |
| 3.4.1 SDS-PAGE检测微管蛋白解聚-聚合活性 | 第58-59页 |
| 3.4.2 SDS-PAGE检测微管蛋白缓冲体系置换情况 | 第59-60页 |
| 3.5 微管蛋白-1S复合物,RB3-SLD和TTL四元组装验证 | 第60-62页 |
| 3.5.1 微管蛋白-1S复合物和RB3-SLD组装成复合物T2R-1S的最佳条件考察 | 第60-61页 |
| 3.5.2 复合物T2R-1S和TTL的组装 | 第61-62页 |
| 3.6 微管蛋白-1S复合物,RB3-SLD和TTL四元复合物T2R-TTL-1S晶体结构 | 第62-71页 |
| 3.6.1 微管蛋白-1S复合物晶体生长条件筛选 | 第62-65页 |
| 3.6.2 微管蛋白-1S复合物晶体结构解析 | 第65-66页 |
| 3.6.3 微管蛋白-1S复合物晶体结构与微管蛋白晶体结构对比分析 | 第66-69页 |
| 3.6.4 微管蛋白-1S复合物晶体结构与微管蛋白-PTOX晶体结构对比分析 | 第69-70页 |
| 3.6.5 小结 | 第70-71页 |
| 3.7 检测鬼臼类化合物1S和PTOX体外抑制微管蛋白聚合率 | 第71-73页 |
| 第4章 总结和展望 | 第73-75页 |
| 4.1 总结 | 第73-74页 |
| 4.2 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
