| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 鲤疱疹病毒Ⅱ的研究进展 | 第12页 |
| 1.2 IκBa免疫基因概述 | 第12-13页 |
| 1.3 Rab21免疫基因概述 | 第13-14页 |
| 1.4 干扰素 | 第14-20页 |
| 1.4.1 硬骨鱼干扰素研究 | 第14页 |
| 1.4.2 鱼类干扰素分类 | 第14-16页 |
| 1.4.2.1 鱼类的Ⅰ型IFN | 第15页 |
| 1.4.2.2 鱼类的Ⅱ型IFN | 第15-16页 |
| 1.4.3 重组干扰素的抗病毒活性 | 第16页 |
| 1.4.4 通过dsRNA和病毒感染诱导IFN | 第16-17页 |
| 1.4.5 IFN受体 | 第17页 |
| 1.4.6 干扰素的诱导基因 | 第17-18页 |
| 1.4.7 本研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 异育银鲫免疫基因IκBα,Rab21和IFNc的cDNA全长克隆 | 第20-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-26页 |
| 2.1.1 仪器与试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.1.1 实验所用仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.1.2 实验所用试剂 | 第21页 |
| 2.1.1.3 生物软件 | 第21页 |
| 2.1.1.4 引物 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验材料:病毒菌株的分离和异育银鲫样本的收集 | 第22页 |
| 2.1.3 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.1.3.1 RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.1.3.2 cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.1.3.3 PCR及产物纯化 | 第23页 |
| 2.1.3.4 克隆IκBα的全长cDNA | 第23-26页 |
| 2.1.3.5 多重序列比对和系统发育分析 | 第26页 |
| 2.2 实验结果与分析 | 第26-31页 |
| 2.2.1 rab21的全长及序列分析 | 第26-28页 |
| 2.2.2 IκBα的全长及序列分析 | 第28-31页 |
| 2.2.3 IFNc的全长及序列分析 | 第31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 IκBα,Rab21和IFNc的组织分布和CyHV-2感染前后的差异性表达 | 第33-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-35页 |
| 3.1.1 仪器与试剂 | 第33页 |
| 3.1.1.1 实验器材 | 第33页 |
| 3.1.1.2 实验试剂 | 第33页 |
| 3.1.1.3 生物软件 | 第33页 |
| 3.1.1.4 引物 | 第33页 |
| 3.1.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.3 实验方法 | 第34-35页 |
| 3.1.3.1 引物设计 | 第34页 |
| 3.1.3.2 健康鱼体组织收集及处理 | 第34页 |
| 3.1.3.3 病毒感染前后IκBα,Rab21和IFNc的组织差异性表达 | 第34页 |
| 3.1.3.4 异育银鲫病毒健康/感染组织包括肝、肾、脾、心、鳃和肌肉等组织总RNA的提取 | 第34页 |
| 3.1.3.5 异育银鲫病毒健康/感染组织包括肝、肾、脾、心、鳃和肌肉等组织总RNA第一链cDNA的合成 | 第34-35页 |
| 3.1.3.6 实时劳光定量PCR | 第35页 |
| 3.1.3.7 数据分析 | 第35页 |
| 3.2 实验结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.2.1 IκBα基因在健康的鲫鱼体内的组织分布 | 第35-36页 |
| 3.2.2 Rab21基因在健康的鲫鱼体内的组织分布 | 第36页 |
| 3.2.3 IFNc基因在健康的鲫鱼体内的组织分布 | 第36-37页 |
| 3.2.4 病毒感染0h-72h内IκBα在肾脏内差异性表达 | 第37页 |
| 3.2.5 病毒感染0h-72h内IκBα在肾脏内差异性表达 | 第37-38页 |
| 3.2.6 病毒感染0d-5d内IFNc在肝、肾、脾、鳃,肌肉,肠和脑内差异性表达 | 第38-39页 |
| 3.3 讨论 | 第39-42页 |
| 第四章 重组IFNc抗鲤科疱疹病毒Ⅱ型的免疫保护初步研究 | 第42-51页 |
| 4.1 材料与方法 | 第42-46页 |
| 4.1.1 仪器与试剂 | 第42-43页 |
| 4.1.1.1 实验器材 | 第42页 |
| 4.1.1.2 实验所用试剂 | 第42-43页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.3 实验方法 | 第43-46页 |
| 4.1.3.1 pEGFP–IFNc质粒的构建 | 第43页 |
| 4.1.3.2 质粒提取 | 第43-44页 |
| 4.1.3.3 hela细胞的培养及pEGFP-IFNc转染 | 第44页 |
| 4.1.3.4 真核表达的验证 | 第44-45页 |
| 4.1.3.5 重组质粒在鱼体内的过表达 | 第45页 |
| 4.1.3.6 CyHV-2扩增曲线的测定 | 第45页 |
| 4.1.3.7 ccIFNc蛋白在鱼体内表达的WesternBlot验证 | 第45页 |
| 4.1.3.8 异育银鲫重组干扰素质粒对异育银鲫抗Cyhv-2的免疫保护 | 第45-46页 |
| 4.2 实验结果与分析 | 第46-48页 |
| 4.2.1 pEGFP-IFNc质粒构建及其真核表达 | 第46页 |
| 4.2.2 pEGFP-IFNc质粒在肌肉和肾脏的过表达 | 第46-47页 |
| 4.2.3 过表达IFNc的异育银鲫中CyHV-2的复制效率 | 第47页 |
| 4.2.4 异育银鲫重组干扰素质粒对异育银鲫抗Cyhv-2的免疫保护 | 第47-48页 |
| 4.3 讨论 | 第48-51页 |
| 第五章 结论 | 第51-53页 |
| 5.1 异育银鲫免疫基因IκBα,Rab21和IFNc的cDNA全长克隆 | 第51页 |
| 5.2 IκBα,Rab21和IFNc的组织分布和CyHV-2感染前后的差异性表达 | 第51-52页 |
| 5.3 重组IFNc抗鲤科疱疹病毒Ⅱ型的免疫保护初步研究 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 硕士期间科研成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
