| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 引言 | 第11-24页 |
| 1.1 肝细胞癌 | 第11-14页 |
| 1.1.1 肝细胞癌概述 | 第11页 |
| 1.1.2 肝细胞癌的风险因素 | 第11页 |
| 1.1.3 肝细胞癌的流行病学 | 第11页 |
| 1.1.4 肝细胞癌的治疗现状 | 第11-14页 |
| 1.1.4.1 肝切除术 | 第12页 |
| 1.1.4.2 肝移植 | 第12页 |
| 1.1.4.3 化疗 | 第12-13页 |
| 1.1.4.4 图像导向的经导管治疗 | 第13页 |
| 1.1.4.5 生物治疗 | 第13-14页 |
| 1.2 IL-6与肝细胞癌 | 第14-19页 |
| 1.2.1 IL-6 | 第14-15页 |
| 1.2.2 IL-6受体复合物 | 第15-17页 |
| 1.2.2.1 IL-6的结合位点 | 第15页 |
| 1.2.2.2 IL-6RO和sIL-6Rα | 第15-16页 |
| 1.2.2.3 gp130和sgp130 | 第16-17页 |
| 1.2.3 IL-6与癌症的关系 | 第17-18页 |
| 1.2.4 IL-6对肝细胞癌的影响 | 第18-19页 |
| 1.3 sgp130对IL-6的调节 | 第19-22页 |
| 1.3.1 IL-6信号传导途径 | 第19-20页 |
| 1.3.2 sgp130与血液中的IL-6缓冲液 | 第20页 |
| 1.3.3 sgp130特异性抑制IL-6的反式传导途径 | 第20-22页 |
| 1.4 本课题主要研究内容及创新之处 | 第22-24页 |
| 1.4.1 主要研究内容 | 第22页 |
| 1.4.2 课题创新之处 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-29页 |
| 2.1.1 质粒及细胞株 | 第24页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂及仪器设备 | 第24-26页 |
| 2.1.4 溶液试剂的配制 | 第26-29页 |
| 2.1.4.1 大肠杆菌培养相关试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4.2 核酸电泳相关试剂 | 第27页 |
| 2.1.4.3 超级感受态细胞制备相关试剂 | 第27页 |
| 2.1.4.4 细胞培养相关试剂 | 第27页 |
| 2.1.4.5 SDS-PAGE蛋白电泳相关试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4.6 WB、IHC和IF相关试剂 | 第28页 |
| 2.1.4.7 蛋白纯化相关试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.4.8 肝癌小鼠造模相关试剂 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-44页 |
| 2.2.1 重组质粒构建 | 第29-33页 |
| 2.2.1.1 目的基因的PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 重组质粒构建 | 第30-33页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第33-34页 |
| 2.2.2.1 细胞复苏 | 第33页 |
| 2.2.2.2 细胞传代 | 第33页 |
| 2.2.2.3 细胞计数 | 第33-34页 |
| 2.2.2.4 细胞冻存 | 第34页 |
| 2.2.3 转染细胞株构建 | 第34-35页 |
| 2.2.3.1 无内毒素质粒提取 | 第34页 |
| 2.2.3.2 细胞转染 | 第34-35页 |
| 2.2.3.3 转染后筛选 | 第35页 |
| 2.2.4 蛋白质免疫印迹 | 第35-38页 |
| 2.2.4.1 蛋白质定量 | 第35页 |
| 2.2.4.2 Dot-blot | 第35-36页 |
| 2.2.4.3 蛋白质电泳 | 第36-37页 |
| 2.2.4.4 免疫印迹(WB) | 第37-38页 |
| 2.2.5 蛋白质纯化 | 第38页 |
| 2.2.6 细胞凋亡检测 | 第38-39页 |
| 2.2.7 细胞增殖及毒性检测 | 第39-40页 |
| 2.2.8 细胞划痕实验 | 第40页 |
| 2.2.9 细胞免疫荧光 | 第40-41页 |
| 2.2.10 荷瘤裸鼠造模 | 第41页 |
| 2.2.11 普通KM小鼠肝细胞癌造模 | 第41-42页 |
| 2.2.12 组织石蜡包埋 | 第42页 |
| 2.2.13 HE染色 | 第42页 |
| 2.2.14 免疫组织化学 | 第42-44页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第44-64页 |
| 3.1 pLVX-IRES-ZsGreen1-sgp130重组质粒构建 | 第44-47页 |
| 3.1.1 获取sgp130基因片段与质粒构建 | 第44-46页 |
| 3.1.2 pLVX-IRES-ZsGreenl-sgp130重组质粒的转化与验证 | 第46-47页 |
| 3.2 sgp130蛋白的表达及纯化 | 第47-51页 |
| 3.2.1 sgp130蛋白瞬时表达 | 第47-48页 |
| 3.2.2 sgp130蛋白稳定表达单克隆筛选 | 第48-49页 |
| 3.2.3 sgp130蛋白纯化 | 第49-51页 |
| 3.3 sgp130蛋白对肝细胞癌影响的研究 | 第51-64页 |
| 3.3.1 sgp130在体外对肝细胞癌的影响 | 第51-54页 |
| 3.3.1.1 sgp130抑制HepG2细胞增殖 | 第51-52页 |
| 3.3.1.2 sgp130促进HepG2细胞凋亡 | 第52-53页 |
| 3.3.1.3 sgp130促进HepG2细胞凋亡 | 第53-54页 |
| 3.3.2 sgp130对裸鼠皮下移植瘤的影响 | 第54-59页 |
| 3.3.2.1 sgp130对裸鼠肿瘤生长的影响 | 第54-56页 |
| 3.3.2.2 裸鼠肿瘤组织免疫组化 | 第56-58页 |
| 3.3.2.3 sgp130对裸鼠肿瘤转移的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.3 sgp130对DEN诱导的小鼠肝细胞癌的影响 | 第59-64页 |
| 3.3.3.1 普通KM小鼠内脏形态学观察 | 第59-60页 |
| 3.3.3.2 普通KM小鼠肝脏HE染色 | 第60-61页 |
| 3.3.3.3 普通KM小鼠肝脏肝细胞癌标记物检测 | 第61-64页 |
| 第四章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 4.1 结论 | 第64页 |
| 4.2 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
| 个人简历 | 第77页 |
