| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-16页 |
| 1.1 玉米轮枝镰刀菌研究现状 | 第11-12页 |
| 1.1.1 轮枝镰刀菌病引发的玉米疾病与传播方式 | 第11页 |
| 1.1.2 国内外抗性基因研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 miRNA研究与进展 | 第12-13页 |
| 1.2.1 miRNA生物合成 | 第12-13页 |
| 1.2.2 miRNA功能和作用机制 | 第13页 |
| 1.3 miRNA与抗性相关的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 本研究的目的意义与内容目标 | 第14-16页 |
| 1.4.1 研究目的意义 | 第14页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 两个玉米幼苗自交系小RNA高通量测序与生物信息学分析 | 第16-44页 |
| 2.1 材料、试剂仪器与方法 | 第16-20页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 | 第16页 |
| 2.1.3 试验方法 | 第16-17页 |
| 2.1.3.1 两个玉米自交系幼苗材料总RNA提取 | 第16页 |
| 2.1.3.2 小RNA测序 | 第16-17页 |
| 2.1.4 生物信息学分析 | 第17-20页 |
| 2.1.4.1 测序数据及其质量控制 | 第18-19页 |
| 2.1.4.2 sRNA分类注释 | 第19页 |
| 2.1.4.3 miRNA分析 | 第19页 |
| 2.1.4.4 miRNA表达量分析 | 第19-20页 |
| 2.1.4.5 miRNA差异表达分析 | 第20页 |
| 2.1.4.6 miRNA靶基因预测 | 第20页 |
| 2.2 结果与分析 | 第20-42页 |
| 2.2.1 总RNA质量检测 | 第20-21页 |
| 2.2.2 小RNA测序结果评估和玉米幼苗数据分析 | 第21-32页 |
| 2.2.2.1 小RNA分类注释和数量统计 | 第21-22页 |
| 2.2.2.2 miRNA的鉴定和预测 | 第22-23页 |
| 2.2.2.3 公共和特异表达miRNA分析 | 第23-24页 |
| 2.2.2.4 miRNA碱基长度分布分析 | 第24页 |
| 2.2.2.5 miRNA碱基偏好性分析 | 第24-25页 |
| 2.2.2.6 miRNA家族分析 | 第25-26页 |
| 2.2.2.7 差异miRNA表达分析 | 第26-32页 |
| 2.2.3 miRNA靶基因预测和功能分析 | 第32-42页 |
| 2.2.3.1 miRNA靶基因的统计分析 | 第32-35页 |
| 2.2.3.2 差异表达的已知miRNA的靶基因注释 | 第35-38页 |
| 2.2.3.3 差异表达的novelmiRNA的靶基因富集 | 第38-42页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第42-44页 |
| 2.3.1 测序结果蕴含丰富的小RNA信息 | 第42页 |
| 2.3.2 差异表达miRNA模式 | 第42页 |
| 2.3.3 靶基因富集 | 第42-43页 |
| 2.3.4 差异miRNA靶基因富集 | 第43-44页 |
| 第三章 两个玉米自交系差异miRNA及其靶基因的鉴定分析 | 第44-53页 |
| 3.1 材料、试剂仪器 | 第44页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第44页 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 | 第44页 |
| 3.2 试验方法 | 第44-48页 |
| 3.2.1 引物和探针设计 | 第44-45页 |
| 3.2.2 NorthernBlot验证 | 第45-46页 |
| 3.2.2.1 12%的7M尿素丙烯酰胺胶的配制 | 第45页 |
| 3.2.2.2 电泳 | 第45页 |
| 3.2.2.3 转膜和紫外交联 | 第45页 |
| 3.2.2.4 杂交和探针标记 | 第45-46页 |
| 3.2.2.5 地高辛探针洗脱、封闭、显色和曝光 | 第46页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR验证 | 第46-48页 |
| 3.2.3.1 N6和BT-1幼苗接菌材料总RNA的提取 | 第46页 |
| 3.2.3.2 RNA反转录 | 第46-48页 |
| 3.2.3.3 实时荧光定量PCR反应 | 第48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-52页 |
| 3.3.1 Northernblot验证结果 | 第48-49页 |
| 3.3.2 差异表达miRNA的鉴定 | 第49-52页 |
| 3.3.2.1 测序miRNA成熟体的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3.2.2 测序数据novelmiRNAprecursor前体的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.2.3 差异表达miRNA靶基因的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 相关差异miRNA及其靶基因在接菌幼苗中的鉴定分析 | 第53-57页 |
| 4.1 材料、试剂仪器 | 第53页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第53页 |
| 4.1.2 主要试剂与仪器 | 第53页 |
| 4.2 试验方法 | 第53页 |
| 4.3 结果分析 | 第53-56页 |
| 4.3.1 潜在抗性miRNA成熟体的鉴定 | 第53-54页 |
| 4.3.2 潜在抗性miRNA靶基因的鉴定 | 第54-56页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 潜在抗性相关miRNA的载体构建 | 第57-62页 |
| 5.1 材料、试剂仪器 | 第57页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第57页 |
| 5.1.1.2 主要试剂 | 第57页 |
| 5.1.1.3 主要仪器 | 第57页 |
| 5.2 试验方法 | 第57-60页 |
| 5.2.1 基因过表达载体构建 | 第57-59页 |
| 5.2.1.1 构建miR398、miR408、miR528和miR164过表达载体引物设计 | 第57-58页 |
| 5.2.1.2 PCR扩增 | 第58页 |
| 5.2.1.3 PCR产物回收及PCR产物和载体酶切 | 第58页 |
| 5.2.1.4 PCR酶切产物和载体连接 | 第58-59页 |
| 5.2.1.5 连接产物转化 | 第59页 |
| 5.2.1.6 单克隆挑取及鉴定 | 第59页 |
| 5.2.1.7 扩繁提质粒并测序鉴定 | 第59页 |
| 5.2.2 CRISPR/Cas9基因突变载体构建 | 第59-60页 |
| 5.2.2.1 CRISPR/Cas9载体靶位点设计 | 第59-60页 |
| 5.2.2.2 引物设计 | 第60页 |
| 5.2.2.3 PCR扩增 | 第60页 |
| 5.2.2.4 扩繁提质粒并测序鉴定 | 第60页 |
| 5.2.3 构建好载体转化农杆菌及鉴定 | 第60页 |
| 5.3 结果与分析 | 第60-61页 |
| 5.3.1 过表达载体构建结果 | 第60-61页 |
| 5.3.2 CRISPR/Cas9突变载体构建结果 | 第61页 |
| 5.4 结论与讨论 | 第61-62页 |
| 第六章 结论与讨论 | 第62-64页 |
| 6.1 两玉米自交系差异抗性小RNA测序结果 | 第62页 |
| 6.2 两玉米自交系差异抗性的测序数据验证及接菌幼苗的验证 | 第62-63页 |
| 6.3 潜在相关抗性差异miRNA的载体构建对于潜在相关抗轮枝镰刀菌的miRNA | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-75页 |
| ABSTRACT | 第75-77页 |
