| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第12-30页 |
| 1.1 水稻草状矮化病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)和水稻锯齿叶矮缩病毒(Riceragged stunt virus, RRSV)的研究概况 | 第12-15页 |
| 1.1.1 RGSV和RRSV的发生与危害 | 第12页 |
| 1.1.2 RGSV和RRSV病毒的形态与特性 | 第12-13页 |
| 1.1.3 RGSV和RRSV基因组结构与功能 | 第13-14页 |
| 1.1.4 防治策略 | 第14-15页 |
| 1.2 褐飞虱对RGSV和RRSV的传播与获取 | 第15-17页 |
| 1.2.1 褐飞虱危害后水稻的症状 | 第15-16页 |
| 1.2.2 褐飞虱传毒能力的研究 | 第16页 |
| 1.2.3 水稻对褐飞虱的抗性机制 | 第16-17页 |
| 1.3 植物茉莉酸的研究进展 | 第17-25页 |
| 1.3.1 茉莉酸的发现及其结构 | 第17-18页 |
| 1.3.2 茉莉酸类的生理作用 | 第18-21页 |
| 1.3.3 茉莉酸的生物合成 | 第21页 |
| 1.3.4 茉莉酸生物合成中的相关基因 | 第21-25页 |
| 1.4 本研究的核心技术 | 第25-28页 |
| 1.4.1 高效液相色谱-质谱联用 | 第25-26页 |
| 1.4.2 荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 1.4.3 酵母双杂交 | 第27-28页 |
| 1.4.4 农杆菌介导的水稻遗传转化体系 | 第28页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 第二章 高效液相色谱质谱联用检测水稻草状矮化病毒和水稻锯齿叶矮缩病毒胁迫下茉莉酸含量 | 第30-41页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-31页 |
| 2.2.1 植物材料及试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第31页 |
| 2.2.3 实验检测RGSV和RRSV的引物 | 第31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.3.1 水稻RNA提取及阳性植株的检测 | 第31-33页 |
| 2.3.2 标品配置及HPLC-MS的条件 | 第33-34页 |
| 2.3.3 茉莉酸的提取与纯化 | 第34页 |
| 2.4 结果与分析 | 第34-40页 |
| 2.4.1 RGSV和RRSV病株的检测 | 第34-36页 |
| 2.4.2 茉莉酸的定性与定量 | 第36-40页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 RGSV和RRSV对水稻内源茉莉酸合成及诱导相关基因表达量的影响 | 第41-61页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.2.1 植物材料及试剂 | 第41页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第41-42页 |
| 3.3 荧光定量方法 | 第42-44页 |
| 3.3.1 RT-qPCR引物设计原则 | 第42页 |
| 3.3.2 荧光定量cDNA模板 | 第42页 |
| 3.3.3 RT-qPCR引物的筛选 | 第42-43页 |
| 3.3.4 内参基因选择——绘制标曲 | 第43页 |
| 3.3.5 水稻JA合成及代谢相关基因表达量测定 | 第43-44页 |
| 3.4 结果与分析 | 第44-57页 |
| 3.4.1 RT-qPCR引物筛选 | 第44页 |
| 3.4.2 内参基因与目的基因标准曲线 | 第44-50页 |
| 3.4.3 茉莉酸合成与代谢相关基因表达量的检测 | 第50-57页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第57-61页 |
| 3.5.1 RGSV和RRSV中LOX基因家族表达量结果分析 | 第57-58页 |
| 3.5.2 JA合成关键中间酶基因OsAOS1、OsAOS2、OsAOC表达量结果分析 | 第58-59页 |
| 3.5.3 过氧化物酶体中OPR基因家族及OsACX1表达量结果分析 | 第59页 |
| 3.5.4 胞液中OsJMT1表达量结果分析 | 第59-60页 |
| 3.5.5 OsHPL3——生成GLVs相关基因 | 第60-61页 |
| 第四章 酵母双杂交检测JA代谢酶相关基因与病毒基因间互作情况 | 第61-80页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 实验材料 | 第61-62页 |
| 4.2.1 材料及试剂 | 第61-62页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第62页 |
| 4.3 方法 | 第62-69页 |
| 4.3.1 酵母载体的构建 | 第62-66页 |
| 4.3.2 酵母AH109感受态细胞的制备 | 第66-67页 |
| 4.3.3 重组质粒共转化酵母感受态细胞 | 第67-68页 |
| 4.3.4 蛋白互作的检测 | 第68-69页 |
| 4.4 结果与分析 | 第69-77页 |
| 4.4.1 目的基因扩增及中间载体连接 | 第69页 |
| 4.4.2 终载体连接及重组质粒菌液PCR鉴定 | 第69-71页 |
| 4.4.3 重组质粒酶切鉴定 | 第71-73页 |
| 4.4.4 JA合成与代谢相关基因OsAOC、OsACX1、OsJMT1、OsHPL3与RGSV及RRSV病毒蛋白间的互作检测 | 第73-77页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第77-80页 |
| 第五章 农杆菌介导的OsJMT1基因遗传转化 | 第80-91页 |
| 5.1 引言 | 第80页 |
| 5.2 实验材料 | 第80-81页 |
| 5.2.1 材料及试剂 | 第80页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第80-81页 |
| 5.3 RNAi载体及过表达载体的构建 | 第81-85页 |
| 5.3.1 RNAi载体的构建 | 第81-82页 |
| 5.3.2 过表达载体构建 | 第82-83页 |
| 5.3.3 RNAi及过表达载体转化农杆菌 | 第83-84页 |
| 5.3.4 水稻快速遗传转化——农杆菌介导法 | 第84-85页 |
| 5.4 结果与分析 | 第85-90页 |
| 5.4.1 RNAi载体构建 | 第85-88页 |
| 5.4.2 过表达载体的构建 | 第88-90页 |
| 5.5 小结与讨论 | 第90-91页 |
| 第六章 总结与展望 | 第91-93页 |
| 6.1 总结 | 第91页 |
| 6.2 展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 附录一 荧光定量基因登录号及引物设计序列 | 第101-103页 |
| 附录二 常用培养基的配制 | 第103-106页 |
| 附录三 本文所用的植物表达载体 | 第106-109页 |
| 附录四 酵母培养基的配制 | 第109-111页 |
| 附录五 转基因培养基的配制 | 第111-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
