| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第10-16页 |
| 第一部分 绪论 | 第16-22页 |
| 1.1 细胞壁的生物合成及研究进展 | 第16页 |
| 1.2 纤维素的生物合成及研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 COBRA基因家族的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.4 农杆菌介导的遗传转化及其应用进展 | 第18-19页 |
| 1.4.1 农杆菌介导法原理简介 | 第18页 |
| 1.4.2 农杆菌介导法的应用进展 | 第18-19页 |
| 1.5 植物组织培养原理及转基因番茄的应用进展 | 第19-20页 |
| 1.5.1 植物组织培养原理 | 第19页 |
| 1.5.2 番茄的遗传转化 | 第19-20页 |
| 1.5.3 转基因番茄的研究进展 | 第20页 |
| 1.6 同源共抑制及研究进展 | 第20-21页 |
| 1.7 番茄果实货架期及其研究进展 | 第21页 |
| 1.8 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第22-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.1 分子生物学常用酶 | 第22页 |
| 2.2.2 常用生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.3 常用溶液与试剂的配制 | 第23-30页 |
| 2.3.1 植物组织石蜡切片相关试剂配制 | 第23-24页 |
| 2.3.2 MS基本培养基母液配方(mg/L) | 第24-25页 |
| 2.3.3 MS培养基激素配制方法 | 第25-26页 |
| 2.3.4 组培培养基配方 | 第26-28页 |
| 2.3.5 CTAB基本培养基配方 | 第28-29页 |
| 2.3.6 TAE基本培养基配方 | 第29页 |
| 2.3.7 YEB基本培养基配方 | 第29页 |
| 2.3.8 LB基本培养基配方 | 第29-30页 |
| 2.4 主要仪器与设备 | 第30-31页 |
| 2.5 分子实验方法 | 第31-39页 |
| 2.5.1 载体构建基本步骤 | 第31-32页 |
| 2.5.2 引物设计要求 | 第32-33页 |
| 2.5.3 米总RNA的提取 | 第33页 |
| 2.5.4 mRNA反转录为cDNA | 第33-34页 |
| 2.5.5 PCR反应体系和程序 | 第34-35页 |
| 2.5.6 连接转化 | 第35页 |
| 2.5.7 挑克隆 | 第35页 |
| 2.5.8 核酸检测琼脂糖凝胶电泳(Agarose gel electrophoresis) | 第35-36页 |
| 2.5.9 提质粒 | 第36-37页 |
| 2.5.10 小切鉴定 | 第37页 |
| 2.5.11 测序 | 第37页 |
| 2.5.12 大切胶回收 | 第37-38页 |
| 2.5.13 DNA片段与载体的连接 | 第38页 |
| 2.5.14 大肠杆菌DH5α感受态的制备与转化 | 第38页 |
| 2.5.15 农杆菌EHA105菌株的感受态的制备与转化 | 第38-39页 |
| 2.5.16 高压蒸汽灭菌 | 第39页 |
| 2.5.17 过滤灭菌 | 第39页 |
| 2.6 组培实验方法步骤 | 第39-40页 |
| 2.6.1 发种子 | 第39页 |
| 2.6.2 洗种子 | 第39-40页 |
| 2.6.3 预培养 | 第40页 |
| 2.6.4 侵染 | 第40页 |
| 2.6.5 筛选 | 第40页 |
| 2.6.6 生根 | 第40页 |
| 2.6.7 移苗 | 第40页 |
| 2.7 转基因苗阳性鉴定 | 第40-41页 |
| 2.7.1 DNA阳性鉴定 | 第40-41页 |
| 2.7.2 半定量RT-PCR分析 | 第41页 |
| 2.8 果实细胞壁物质提取 | 第41页 |
| 2.9 果实细胞壁纤维素含量的测定 | 第41-42页 |
| 2.9.1 标准曲线制作 | 第41-42页 |
| 2.9.2 样品纤维素含量测定 | 第42页 |
| 2.10 果实质构分析及货架期实验 | 第42页 |
| 2.10.1 果实硬度测定 | 第42页 |
| 2.10.2 果实货架期实验 | 第42页 |
| 2.11 石蜡切片 | 第42-44页 |
| 2.12 番茄红素含量的测定 | 第44-45页 |
| 2.13 植物培养条件 | 第45-46页 |
| 2.13.1 番茄的培养条件 | 第45页 |
| 2.13.2 玉米的培养条件 | 第45-46页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第46-57页 |
| 3.1 植物表达载体的构建 | 第46-49页 |
| 3.1.1 玉米BK2L3基因片段的克隆 | 第46页 |
| 3.1.2 玉米BK2L3基因连接转化 | 第46-47页 |
| 3.1.3 玉米BK2L3基因测序结果 | 第47页 |
| 3.1.4 玉米BK2L3基因与植物表达载体连接转化 | 第47-48页 |
| 3.1.5 农杆菌转化 | 第48-49页 |
| 3.2 植物组织培养 | 第49-51页 |
| 3.2.1 愈伤的诱导 | 第49-50页 |
| 3.2.2 愈伤的分化和根的形成 | 第50-51页 |
| 3.3 转基因苗的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.1 NPTⅡ扩增条带 | 第51页 |
| 3.3.2 半定量RT-PCR分析基因表达 | 第51-52页 |
| 3.4 转基因果实的理化验证实验 | 第52-57页 |
| 3.4.1 番茄红素含量的测定 | 第52-53页 |
| 3.4.2 纤维素含量的测定 | 第53页 |
| 3.4.3 果皮硬度、货架期实验 | 第53-55页 |
| 3.4.4 细胞壁结构观察 | 第55-57页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第57-59页 |
| 4.1 结论与讨论 | 第57页 |
| 4.2 后续工作展望 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第65页 |
