| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 启动子概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 启动子的概念与主要结构 | 第10-11页 |
| 1.1.2 启动子的类型 | 第11-12页 |
| 1.1.3 启动子的主要研究方法 | 第12-13页 |
| 1.2 DAD基因简述 | 第13-15页 |
| 1.2.1 细胞凋亡简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 DAD基因的研究进展 | 第14页 |
| 1.2.3 DAD基因的主要功能 | 第14-15页 |
| 1.3 棉花概述 | 第15-17页 |
| 1.4 本研究的技术路线 | 第17-18页 |
| 第二章 植物DAD基因的结构与系统发育分析 | 第18-25页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第18-19页 |
| 2.1.1 DAD序列收集与基因结构 | 第18-19页 |
| 2.1.2 DAD系统发育关系 | 第19页 |
| 2.2 实验结果与分析 | 第19-24页 |
| 2.2.1 DAD基因的结构与定位 | 第19-22页 |
| 2.2.2 DAD基因的系统发育关系分析 | 第22-24页 |
| 2.3 讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 陆地棉各器官中DAD基因表达的相对定量 | 第25-31页 |
| 3.1 实验材料 | 第25页 |
| 3.2 实验方法 | 第25-26页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第26-29页 |
| 3.3.1 DAD1和DAD2在陆地棉叶中的表达 | 第26-27页 |
| 3.3.2 DAD1和DAD2在陆地棉花瓣中的表达 | 第27-28页 |
| 3.3.3 DAD1和DAD2在陆地棉种子中的表达 | 第28页 |
| 3.3.4 DAD1和DAD2在陆地棉种子纤维中的表达 | 第28-29页 |
| 3.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第四章 陆地棉DAD2启动子的克隆 | 第31-43页 |
| 4.1 实验材料 | 第31-33页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 4.1.2 菌株与载体 | 第31-32页 |
| 4.1.3 药品试剂 | 第32页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第32页 |
| 4.1.5 主要溶液与培养基的配制 | 第32-33页 |
| 4.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 4.2.1 棉花总DNA的提取 | 第33页 |
| 4.2.2 DAD2基因启动子的引物设计 | 第33-34页 |
| 4.2.3 DAD2基因启动子的PCR扩增 | 第34页 |
| 4.2.4 DAD2基因启动子的纯化回收 | 第34-35页 |
| 4.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 4.2.6 DAD2基因启动子与T载体连接 | 第36页 |
| 4.2.7 连接产物转化大肠杆菌 | 第36-37页 |
| 4.2.8 单克隆菌体的PCR检测及测序 | 第37页 |
| 4.2.9 DAD2基因启动子序列的生物信息学分析 | 第37页 |
| 4.3 结果与分析 | 第37-41页 |
| 4.3.1 棉花总DNA的提取 | 第37-38页 |
| 4.3.2 DAD2基因启动子PCR扩增 | 第38页 |
| 4.3.3 DAD2基因启动子克隆测序 | 第38-39页 |
| 4.3.4 DAD2基因启动子序列的序列分析 | 第39-41页 |
| 4.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第五章 陆地棉DAD2启动子上序列差异对基因表达的影响 | 第43-63页 |
| 5.1 实验材料 | 第43-46页 |
| 5.1.1 菌株与载体 | 第43-44页 |
| 5.1.2 药品试剂 | 第44页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第44-45页 |
| 5.1.4 主要溶液与培养基的配制 | 第45-46页 |
| 5.2 实验方法 | 第46-54页 |
| 5.2.1 重组质粒的提取 | 第46页 |
| 5.2.2 DAD2基因启动子与GUS融合基因植物表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 5.2.3 农杆菌感受态的制备 | 第48页 |
| 5.2.4 重组质粒转化农杆菌 | 第48页 |
| 5.2.5 单克隆菌体挑取,培养及PCR检测 | 第48-49页 |
| 5.2.6 烟草的种植 | 第49页 |
| 5.2.7 烟草的侵染 | 第49页 |
| 5.2.8 GUS组织化学染色与观察 | 第49-50页 |
| 5.2.9 GUS酶活测定 | 第50-51页 |
| 5.2.10 棉花总RNA的提取 | 第51-52页 |
| 5.2.11 总RNA的质量的检测 | 第52-53页 |
| 5.2.12 RNA反转录 | 第53页 |
| 5.2.13 荧光定量PCR的引物设计 | 第53页 |
| 5.2.14 荧光定量PCR的引物检测 | 第53-54页 |
| 5.2.15 荧光定量PCR的扩增体系及程序 | 第54页 |
| 5.3 结果与分析 | 第54-61页 |
| 5.3.1 质粒的提取 | 第54-55页 |
| 5.3.2 表达载体的构建及鉴定 | 第55-56页 |
| 5.3.3 重组质粒转化农杆菌的鉴定 | 第56-57页 |
| 5.3.4 GUS组织化学染色结果分析 | 第57-58页 |
| 5.3.5 GUS酶活测定结果分析 | 第58页 |
| 5.3.6 总RNA的提取 | 第58-59页 |
| 5.3.7 荧光定量PCR引物的检测 | 第59-60页 |
| 5.3.8 DAD2基因在陆地棉叶片中的相对表达 | 第60-61页 |
| 5.4 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 在读研究生期间发表的学术论文及研究成果 | 第70-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
