| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 前言 | 第10-22页 |
| 1 流感概述 | 第10-11页 |
| 2 流感病毒的病原学 | 第11-12页 |
| ·流感病毒的形态结构 | 第11-12页 |
| ·分类及命名 | 第12页 |
| 3 基因组编码的蛋白及功能 | 第12-15页 |
| ·血凝素蛋白(HA) | 第12-13页 |
| ·神经氨酸酶(NA) | 第13页 |
| ·核蛋白(NP) | 第13-14页 |
| ·基质蛋白(MP) | 第14页 |
| ·聚合酶(PB1,PB2,PA) | 第14页 |
| ·非结构蛋白(NS1,NS2) | 第14-15页 |
| 4 流感病毒的抗原变异 | 第15页 |
| 5 流感疫苗的研究进展 | 第15-21页 |
| ·灭活疫苗 | 第16-17页 |
| ·减毒活疫苗 | 第17页 |
| ·基因工程疫苗 | 第17页 |
| ·核酸疫苗 | 第17-19页 |
| ·细胞培养疫苗 | 第19-20页 |
| ·表位疫苗 | 第20-21页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 试验研究 | 第22-38页 |
| 1 材料 | 第22-26页 |
| ·菌株、质粒、细胞和病毒 | 第22页 |
| ·酶与试剂 | 第22-23页 |
| ·序列分析软件 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·各种溶液及培养基 | 第23-26页 |
| 2 方法 | 第26-38页 |
| ·H5亚型表位盒的构建 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第27页 |
| ·质粒的提取与定量 | 第27-29页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第29页 |
| ·DNA片段的回收 | 第29页 |
| ·外源DNA片段与载体的连接反应 | 第29页 |
| ·DNA重组子筛选及酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·流感DNA疫苗的构建 | 第30-31页 |
| ·流感病毒复合多表位DNA重组体的酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·传代细胞的培养 | 第32-33页 |
| ·重组体转染细胞 | 第33页 |
| ·重组质粒表达产物的检测 | 第33-34页 |
| ·流感病毒复合多表位DNA疫苗的制备和纯化 | 第34页 |
| ·实验分组、小鼠免疫及采样 | 第34-35页 |
| ·免疫小鼠血清ELISA抗体检测 | 第35页 |
| ·ELISA预包被试剂盒检测免疫小鼠血清中细胞因子IL-4及IFN-γ含量 | 第35-36页 |
| ·细胞介导的免疫应答检测 | 第36-38页 |
| 结果 | 第38-48页 |
| 1 H5亚型表位盒的串联 | 第38页 |
| ·CTL T细胞表位盒的构建 | 第38页 |
| ·ThB表位盒的构建 | 第38页 |
| 2 H5亚型表位盒的合成 | 第38-39页 |
| ·CTL T细胞表位盒的合成 | 第38页 |
| ·ThB细胞表位盒的合成 | 第38-39页 |
| 3 多价流感DNA疫苗的分子设计结果 | 第39页 |
| 4 DNA重组体的酶切鉴定结果(见图7) | 第39-40页 |
| 5 DNA重组体表达产物的检测 | 第40-42页 |
| ·DNA重组体转染细胞的RT-PCR检测 | 第40-41页 |
| ·DNA重组体pVAX1-H3-ETH5-H1HA1的IFA检测结果 | 第41页 |
| ·DNA重组体pVAX1-NP-ECH5的IFA检测结果 | 第41-42页 |
| 6 小鼠血清中ELISA抗体检测结果 | 第42-44页 |
| ·各免疫组小鼠抗H3HA抗体检测 | 第42页 |
| ·各免疫组小鼠抗H1HA抗体检测 | 第42-43页 |
| ·各免疫组小鼠抗H5HA抗体检测 | 第43-44页 |
| 7 免疫小鼠血清中细胞因子IL-4及IFN-γ检测结果 | 第44-45页 |
| 8 脾脏T淋巴细胞增殖试验结果 | 第45-48页 |
| 讨论 | 第48-56页 |
| 1 流感复合多表位核酸疫苗的分子设计 | 第48-49页 |
| ·流感复合多表位核酸疫苗目的基因的选择 | 第48页 |
| ·流感复合多表位核酸疫苗表达载体的选择 | 第48-49页 |
| ·流感复合多表位核酸疫苗的分子设计 | 第49页 |
| 2 重组DNA疫苗在真核细胞中表达及检测 | 第49-51页 |
| ·DNA重组体在真核细胞中的转染 | 第50页 |
| ·DNA重组体在真核细胞中表达的检测 | 第50-51页 |
| 3 流感DNA疫苗免疫原性的评价 | 第51-53页 |
| ·流感DNA疫苗体液免疫效果的评价 | 第51-52页 |
| ·流感DNA疫苗细胞免疫效果的评价 | 第52-53页 |
| ·免疫途径和方法对DNA免疫效果的影响 | 第53页 |
| 4 流感病毒H1、H3亚型疫苗研究进展 | 第53-56页 |
| ·流感病毒结构蛋白研究进展 | 第53-54页 |
| ·流感病毒表位疫苗的国内外研究进展 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64页 |
