| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 前言 | 第10-20页 |
| 1 艾滋病毒的分子生物学特性、分布及防制技术研的究进展 | 第10-12页 |
| ·艾滋病毒的概况 | 第10页 |
| ·艾滋病毒的危害 | 第10页 |
| ·艾滋病毒基因组及病毒颗粒的结构特点 | 第10-11页 |
| ·艾滋病毒的治病机理 | 第11-12页 |
| 2 艾滋病及艾滋病毒的防治 | 第12页 |
| 3 疫苗 | 第12-14页 |
| ·疫苗的种类 | 第13页 |
| ·DNA疫苗 | 第13-14页 |
| 4 DNA疫苗转导载体 | 第14-17页 |
| ·病毒核酸转导载体 | 第14-16页 |
| ·非病毒核酸转导载体 | 第16-17页 |
| 5 穿膜肽 | 第17-18页 |
| 6 DNA序列识别及结合系统 | 第18页 |
| 7 本研究的意义 | 第18-20页 |
| 实验材料 | 第20-24页 |
| 1 菌株、质粒和细胞 | 第20页 |
| 2 酶与试剂 | 第20页 |
| 3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 4 各种溶液及培养基 | 第21-24页 |
| 方法 | 第24-37页 |
| 1 DNA疫苗的构建 | 第24-29页 |
| ·DNA疫苗构建思路 | 第24-26页 |
| ·重组质粒pVAX1-UAS的构建 | 第24页 |
| ·重组质粒pVAX1-UAS-EGFP的构建 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pVAX1-UAS-MEGNp24的构建 | 第25-26页 |
| ·DNA疫苗的构建 | 第26-29页 |
| ·重组质粒pVAX1-UAS的构建 | 第26-28页 |
| ·重组质粒pVAX1-UAS-EGFP的构建 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pVAX1-UAS-MEGNp24的构建 | 第29页 |
| ·DNA疫苗重组质粒的鉴定 | 第29页 |
| 2 重组原核表达质粒pET-TG的构建、表达及纯化 | 第29-34页 |
| ·pET-TG的构建思路 | 第29-30页 |
| ·目的基因的制备与克隆 | 第30-31页 |
| ·DNA重组子筛选、PCR及酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组表达载体的PCR鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组表达载体的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达及鉴定 | 第32-34页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第32-33页 |
| ·免疫印迹检测(Western-Blot) | 第33-34页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第34页 |
| ·重组目的蛋白的纯化 | 第34页 |
| ·重组蛋白表达产物的定量 | 第34页 |
| 3 目的蛋白与重组质粒的结合活性研究 | 第34-35页 |
| ·重组质粒与目的蛋白最适结合比例实验 | 第34-35页 |
| ·重组质粒与目的蛋白最适结合时间实验 | 第35页 |
| ·重组质粒与目的蛋白结合特异性实验 | 第35页 |
| 4 目的蛋白的细胞转导活性实验 | 第35-37页 |
| ·传代细胞的培养 | 第35-36页 |
| ·细胞转导 | 第36页 |
| ·重组体的间接免疫荧光法(IFA)检测 | 第36-37页 |
| 结果 | 第37-49页 |
| 1 DNA疫苗重组质粒载体的酶切鉴定 | 第37-39页 |
| ·重组质粒pVAX1-UAS的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·重组表达质粒pVAX 1-UAS-EGFP的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组表达质粒pVAX 1-UAS-MEGNp24的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 2 目的基因的克隆及重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第39页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组表达质粒pET-TG的酶切鉴定 | 第40页 |
| 3 TG蛋白的原核表达、鉴定及纯化 | 第40-43页 |
| ·重组表达载体pET-TG的表达 | 第40-41页 |
| ·蛋白存在形式的鉴定 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白Western-blotting分析 | 第42页 |
| ·纯化蛋白的SDS-PAGE分析 | 第42-43页 |
| 4 蛋白与质粒结合活性实验结果 | 第43-46页 |
| ·质粒浓度的测定 | 第43页 |
| ·TG蛋白浓度的测定 | 第43页 |
| ·浓度对TG蛋白与pVAX1-UAS-EGFP质粒结合活性的影响 | 第43-44页 |
| ·作用时间对TG蛋白与pVAX1-UAS-EGFP质粒结合活性的影响 | 第44-45页 |
| ·TG蛋白与pVAX1-UAS-EGFP质粒结合的特异性试验 | 第45-46页 |
| 5 细胞转导活性实验结果 | 第46-49页 |
| ·TG蛋白细胞转导试验结果 | 第46-47页 |
| ·IFA检测结果 | 第47-49页 |
| 讨论 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 在读期间发表的文章 | 第60页 |
