| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-31页 |
| 1.1 布鲁氏菌病概述 | 第16页 |
| 1.2 布鲁氏菌分类与感染宿主 | 第16-17页 |
| 1.3 细菌的鉴定方法 | 第17-18页 |
| 1.3.1 细菌的分离 | 第17-18页 |
| 1.3.2 种型鉴定 | 第18页 |
| 1.3.3 分子生物学鉴定 | 第18页 |
| 1.4 布鲁氏菌分子流行研究方法 | 第18-21页 |
| 1.4.1 MLVA | 第19-20页 |
| 1.4.2 MLST | 第20-21页 |
| 1.5 布鲁氏菌基因组学研究 | 第21-22页 |
| 1.6 布鲁氏菌疫苗研究 | 第22-28页 |
| 1.6.1 人用布鲁氏菌病疫苗 | 第22页 |
| 1.6.2 动物布鲁氏菌病减毒活疫苗 | 第22-25页 |
| 1.6.2.1 流产布鲁氏菌活疫苗株19(S19) | 第23页 |
| 1.6.2.2 流产布鲁氏菌活疫苗株RB51 | 第23页 |
| 1.6.2.3 马耳他布鲁氏菌活疫苗株Rev-1 | 第23-24页 |
| 1.6.2.4 马耳他布鲁氏菌活疫苗M5-90 | 第24页 |
| 1.6.2.5 猪布鲁氏菌活疫苗株S2 | 第24-25页 |
| 1.6.3 布鲁氏菌病基因工程疫苗 | 第25-27页 |
| 1.6.3.1 亚单位疫苗 | 第25页 |
| 1.6.3.2 重组蛋白 | 第25-26页 |
| 1.6.3.3 活载体疫苗 | 第26页 |
| 1.6.3.4 DNA疫苗 | 第26-27页 |
| 1.6.3.5 外膜蛋白包囊疫苗 | 第27页 |
| 1.6.4 基因修饰减毒活疫苗 | 第27-28页 |
| 1.7 疫苗用表位多肽 | 第28-29页 |
| 1.8 树突状细胞功能及应用 | 第29-30页 |
| 1.8.1 树突状细胞的亚群分类 | 第29页 |
| 1.8.2 树突状细胞的功能 | 第29-30页 |
| 1.8.3 树突状细胞在疫苗上的应用 | 第30页 |
| 1.9 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 第二章 我国西北地区羊布鲁氏菌分离与鉴定 | 第31-41页 |
| 2.1 材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 病料的采集 | 第31-32页 |
| 2.1.2 主要试剂及溶液 | 第32-33页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.2 方法 | 第34-36页 |
| 2.2.1 细菌的分离 | 第34页 |
| 2.2.2 分离菌株的生化鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.2.1 CO_2需求试验 | 第34页 |
| 2.2.2.2 细菌悬液的制备 | 第34页 |
| 2.2.2.3 H_2S试验 | 第34页 |
| 2.2.2.4 单特异抗血清凝集试验 | 第34页 |
| 2.2.2.5 硫堇、复红染料和噬菌体抑制试验 | 第34-35页 |
| 2.2.3 分离菌株的AMOS-PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.3.1 细菌基因组的提取 | 第35页 |
| 2.2.3.2 反应用引物 | 第35-36页 |
| 2.2.3.3 扩增反应 | 第36页 |
| 2.3 结果 | 第36-40页 |
| 2.3.1 菌株的分离 | 第36页 |
| 2.3.2 生化鉴定 | 第36-38页 |
| 2.3.3 AMOS-PCR | 第38-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 西北地区布鲁氏菌基因型特征及分子流行病学 | 第41-61页 |
| 3.1 材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 主要试剂及溶液 | 第41-42页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第42页 |
| 3.1.3 可用数据的来源 | 第42页 |
| 3.2 方法 | 第42-48页 |
| 3.2.1 细菌的培养 | 第42-43页 |
| 3.2.2 基因组的提取 | 第43页 |
| 3.2.3 MLVA16基因分析 | 第43-45页 |
| 3.2.3.1 引物 | 第43-45页 |
| 3.2.3.2 扩增反应 | 第45页 |
| 3.2.4 MLVA数据读取 | 第45页 |
| 3.2.5 MLVA数据分析 | 第45-46页 |
| 3.2.6 MLST分型 | 第46-47页 |
| 3.2.6.1 引物 | 第46-47页 |
| 3.2.6.2 PCR反应 | 第47页 |
| 3.2.6.3 MLST数据读取 | 第47页 |
| 3.2.7 MLST数据分析 | 第47-48页 |
| 3.2.8 甘肃庆阳地区羊布鲁氏菌流行病学分析 | 第48页 |
| 3.2.8.1 羊布鲁氏菌血气流行病数据统计与分析 | 第48页 |
| 3.2.8.2 羊布鲁氏菌分子流行病学分析 | 第48页 |
| 3.3 结果 | 第48-58页 |
| 3.3.1 MLVA | 第48-49页 |
| 3.3.1.1 HGDI分析 | 第48-49页 |
| 3.3.1.2 分离菌株的MLVA基因型 | 第49页 |
| 3.3.2 分离菌株聚类 | 第49-51页 |
| 3.3.3 西北地区动物布鲁氏菌基因型特征和分子流行病学 | 第51-53页 |
| 3.3.4 MLST | 第53-54页 |
| 3.3.5 布鲁氏菌菌株的MLST特征 | 第54-55页 |
| 3.3.6 我国西北地区布鲁氏菌流行原因的分析 | 第55-56页 |
| 3.3.7 甘肃庆阳地区羊布鲁氏菌流行病学 | 第56-58页 |
| 3.3.7.1 羊布鲁氏菌血清流行病学 | 第56-58页 |
| 3.3.7.2 分子流行病学分析 | 第58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-61页 |
| 第四章 马耳他布鲁氏菌全基因组测序与分析 | 第61-78页 |
| 4.1 材料 | 第61-62页 |
| 4.1.1 主要试剂及溶液 | 第61页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第61-62页 |
| 4.2 方法 | 第62-65页 |
| 4.2.1 菌株的培养 | 第62页 |
| 4.2.2 基因组提取与文库构建 | 第62页 |
| 4.2.3 全基因组测序会组装 | 第62页 |
| 4.2.4 基因组组份分析 | 第62-63页 |
| 4.2.5 功能基因组的注释和分析 | 第63页 |
| 4.2.5.1 GO数据库注释 | 第63页 |
| 4.2.5.2 KEGG数据库注释 | 第63页 |
| 4.2.5.3 COG数据库注释 | 第63页 |
| 4.2.5.4 细菌病原体毒力因子(VFDB)注释 | 第63页 |
| 4.2.6 比较基因组学分析 | 第63-65页 |
| 4.3 结果 | 第65-74页 |
| 4.3.1 基因组特征 | 第65-70页 |
| 4.3.2 GO数据库注释结果 | 第70-71页 |
| 4.3.3 KEGG数据库注释结果 | 第71-73页 |
| 4.3.4 COG数据库注释结果 | 第73-74页 |
| 4.3.5 比较基因组学与进化分析 | 第74页 |
| 4.3.6 特异基因的分析 | 第74页 |
| 4.4 讨论 | 第74-78页 |
| 第五章 布鲁氏菌免疫蛋白抗原多肽的筛选与鉴定 | 第78-89页 |
| 5.1 材料 | 第78-79页 |
| 5.1.1 主要试剂及溶液 | 第78页 |
| 5.1.2 试验动物 | 第78页 |
| 5.1.3 仪器设备 | 第78-79页 |
| 5.2 方法 | 第79-82页 |
| 5.2.1 蛋白抗原多肽的筛选 | 第79页 |
| 5.2.2.1 OMP16和L7/L12蛋白保守性分析 | 第79页 |
| 5.2.1.2 生物信息学预测 | 第79页 |
| 5.2.2 多肽合成 | 第79页 |
| 5.2.3 多肽ELISA试验 | 第79-80页 |
| 5.2.4 多肽刺激小鼠DCs试验 | 第80-81页 |
| 5.2.4.1 BABL/c小鼠髓源DCs的培养 | 第80-81页 |
| 5.2.4.2 流式细胞检测 | 第81页 |
| 5.2.4.3 细胞体外刺激 | 第81页 |
| 5.2.5 细胞因子抗体芯片检测 | 第81页 |
| 5.2.6 表位多肽小鼠免疫 | 第81-82页 |
| 5.2.6.1 抗原制备 | 第81页 |
| 5.2.6.2 免疫 | 第81-82页 |
| 5.2.7 多肽刺激免疫小鼠PBMCs刺激 | 第82页 |
| 5.2.7.1 小鼠PBMCs的分离 | 第82页 |
| 5.2.7.2 特异性淋巴细胞刺激试验 | 第82页 |
| 5.2.8 细胞因子检测 | 第82页 |
| 5.2.9 统计分析 | 第82页 |
| 5.3 结果 | 第82-88页 |
| 5.3.1 蛋白保守性分析 | 第82页 |
| 5.3.2 蛋白性质分析及表位抗原预测 | 第82-84页 |
| 5.3.2.1 Omp16 | 第82-83页 |
| 5.3.2.2 L7/L12 | 第83-84页 |
| 5.3.3 表位多肽抗原反应原性 | 第84-85页 |
| 5.3.4 表位多肽抗原性 | 第85-86页 |
| 5.3.4.1 DC表型检测 | 第85页 |
| 5.3.4.2 细胞因子抗体芯片检测 | 第85-86页 |
| 5.3.4.3 细胞因子结果分析 | 第86页 |
| 5.3.6 免疫小鼠细胞因子水平 | 第86-88页 |
| 5.4 讨论 | 第88-89页 |
| 第六章 全文结论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 作者简历 | 第107页 |
