| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 综述 | 第10-17页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 BACH1的结构 | 第10-11页 |
| 1.3 BACH1的功能 | 第11-16页 |
| 1.3.1 BACH1在正常细胞中的生理功能 | 第11页 |
| 1.3.2 BACH1在范可尼贫血(FA)中的生理功能 | 第11-15页 |
| 1.3.2.1 范可尼贫血症信号通路 | 第12-13页 |
| 1.3.2.2 ID 底物复合体的泛素化与去泛素化调节 | 第13页 |
| 1.3.2.3 核酸内切酶是FA信号通路中的关键执行者 | 第13-14页 |
| 1.3.2.4 FANCJ在范可尼贫血症信号通路中的作用 | 第14-15页 |
| 1.3.3 BACH1在乳腺癌中的生理功能 | 第15页 |
| 1.3.4 BACH1在其他癌症中的生理功能 | 第15-16页 |
| 1.4 BACH1潜在的治疗策略 | 第16页 |
| 1.5 总结与展望 | 第16-17页 |
| 第2章 BACH1与BTF相互作用结构域的鉴定 | 第17-32页 |
| 2.1 前言 | 第17页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第17-19页 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 | 第17-19页 |
| 2.2.2 实验耗材与仪器 | 第19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第19-20页 |
| 2.3.1.1 细胞复苏 | 第19页 |
| 2.3.1.2 细胞传代 | 第19-20页 |
| 2.3.1.3 细胞冻存 | 第20页 |
| 2.3.2 免疫共沉淀及免疫印迹验证内源BACH1、BTF相互作用 | 第20-21页 |
| 2.3.2.1 裂解细胞 | 第20页 |
| 2.3.2.2 抗体孵育 | 第20页 |
| 2.3.2.3 SDS-PAGE电泳 | 第20页 |
| 2.3.2.4 转膜 | 第20页 |
| 2.3.2.5 封闭 | 第20页 |
| 2.3.2.6 一抗孵育 | 第20-21页 |
| 2.3.2.7 二抗孵育 | 第21页 |
| 2.3.2.8 曝光 | 第21页 |
| 2.3.3 脂质体法转染HEK293T细胞 | 第21-22页 |
| 2.3.4 构建重组质粒pEGFP-C1-BACH1WT及一系列缺失突变体 | 第22-26页 |
| 2.3.4.1 构建重组质粒pEGFP-C1-BACH1WT | 第22-24页 |
| 2.3.4.2 构建重组质粒pEGFP-C1-BACH1的一系列缺失突变体 | 第24-26页 |
| 2.3.5 Westernblot法检测构建的重组质粒pEGFP-C1-BACH1WT及一系列缺失突变体的表达 | 第26-27页 |
| 2.3.6 免疫共沉淀及免疫印迹验证BACH1、BTF相互作用的结构域 | 第27页 |
| 2.4 实验结果 | 第27-30页 |
| 2.4.1 内源BACH1与BTF相互作用 | 第27-28页 |
| 2.4.2 BACH1与BTF相互作用domain是D | 第28-30页 |
| 2.5 讨论 | 第30-32页 |
| 第3章 BACH1与BTF共定位参与DNA损伤修复 | 第32-42页 |
| 3.1 前言 | 第32-33页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第33-34页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第33-34页 |
| 3.2.2 实验耗材与仪器 | 第34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.3.1 药物处理 | 第34-35页 |
| 3.3.2 免疫荧光染色 | 第35-36页 |
| 3.3.2.1 细胞爬片 | 第35页 |
| 3.3.2.2 固定 | 第35页 |
| 3.3.2.3 打孔 | 第35页 |
| 3.3.2.4 封闭 | 第35页 |
| 3.3.2.5 一抗孵育 | 第35-36页 |
| 3.3.2.6 二抗孵育 | 第36页 |
| 3.3.2.7 封片 | 第36页 |
| 3.4 实验结果 | 第36-40页 |
| 3.4.1 不同药物诱导的DNA损伤使BACH1与BTF相互作用增强 | 第36-37页 |
| 3.4.2 cis-DDP处理不同时间内源BACH1、BTF的表达量逐渐增强 | 第37-38页 |
| 3.4.3 免疫荧光染色证明BACH1与BTF共定位参与DNA损伤修复 | 第38-40页 |
| 3.5 讨论 | 第40-42页 |
| 第4章 BACH1在DNA损伤修复通路中位于BTF上游 | 第42-55页 |
| 4.1 前言 | 第42-43页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第43-44页 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 | 第43页 |
| 4.2.2 实验耗材与仪器 | 第43-44页 |
| 4.3 实验方法 | 第44-47页 |
| 4.3.1 激光诱导活细胞DNA损伤动态成像实验方法 | 第44页 |
| 4.3.2 siRNA实验方法 | 第44-46页 |
| 4.3.2.1 siRNA的设计 | 第44-45页 |
| 4.3.2.2 siRNA的制备 | 第45页 |
| 4.3.2.3 siRNA 的转染方法 | 第45-46页 |
| 4.3.3 HCC1937重组BRCA1WT和HCC1937BRCA1(-/-)细胞的培养方法 | 第46-47页 |
| 4.4 实验结果 | 第47-53页 |
| 4.4.1 BACH1缺少D9不影响其参与损伤修复 | 第47-50页 |
| 4.4.2 敲低BTF的表达后不影响BACH1在DNA损伤位点的修复 | 第50-51页 |
| 4.4.2.1 siRNA敲低BTF蛋白的表达 | 第50页 |
| 4.4.2.2 敲低BTF的表达后不影响BACH1在DNA损伤位点的聚集 | 第50-51页 |
| 4.4.3 BACH1、BTF、BRCA1在DNA损伤修复通路中的上下游关系 | 第51-53页 |
| 4.5 讨论 | 第53-55页 |
| 第5章 敲低细胞内BACH1、BTF的表达影响细胞增殖 | 第55-62页 |
| 5.1 前言 | 第55页 |
| 5.2 材料与仪器 | 第55-56页 |
| 5.2.1 实验材料与试剂 | 第55-56页 |
| 5.2.2 实验耗材与仪器 | 第56页 |
| 5.3 实验方法 | 第56-58页 |
| 5.3.1 MTT法检测BACH1-siRNA、BTF-siRNA对HEK293T等细胞增殖的影响 | 第56-57页 |
| 5.3.2 siRNArescue实验 | 第57-58页 |
| 5.4 实验结果 | 第58-61页 |
| 5.4.1 敲低细胞内BACH1、BTF的表达影响细胞增殖活性 | 第58-60页 |
| 5.4.2 siRNArescue实验结果 | 第60-61页 |
| 5.5 讨论 | 第61-62页 |
| 第6章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
