| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 牦牛简介 | 第10页 |
| 1.2 国内外牦牛不同种类及外貌特征 | 第10-13页 |
| 1.3 牦牛毛色选育的意义 | 第13页 |
| 1.4 毛色候选基因研究进展 | 第13-21页 |
| 1.4.1 MC1R基因研究进展 | 第13-16页 |
| 1.4.2 MITF基因研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4.3 Agouti基因研究进展 | 第18-21页 |
| 1.5 本试验的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第22-32页 |
| 2.1 试验动物来源及组织样品的采集 | 第22页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第22页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.3 试验常用试剂及试剂盒 | 第22-23页 |
| 2.4 主要溶液及试剂的配置方法 | 第23页 |
| 2.5 MC1R、Agouti及MITF基因克隆 | 第23-26页 |
| 2.5.1 总RNA的提取及检测 | 第23页 |
| 2.5.2 cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.5.3 引物设计 | 第23-25页 |
| 2.5.4 RT-PCR反应体系及其扩增条件 | 第25页 |
| 2.5.5 PCR产物回收、克隆、鉴定及测序 | 第25-26页 |
| 2.6 候选基因多态性研究 | 第26-28页 |
| 2.6.1 基因组DNA的提取和稀释 | 第26页 |
| 2.6.2 DNA混合池的构建 | 第26页 |
| 2.6.3 引物设计 | 第26-28页 |
| 2.6.4 PCR扩增 | 第28页 |
| 2.6.5 DNA测序 | 第28页 |
| 2.7 候选基因表达分析 | 第28-29页 |
| 2.7.1 引物设计与合成 | 第28-29页 |
| 2.7.2 Real-time PCR | 第29页 |
| 2.8 数据统计分析 | 第29-32页 |
| 2.8.1 生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.8.2 MC1R、MITF、Agouti基因在牦牛各组织的表达分析 | 第30页 |
| 2.8.3 基因表达量分析 | 第30页 |
| 2.8.4 数据处理 | 第30-32页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第32-54页 |
| 3.1 牦牛总RNA提取质量的检测 | 第32页 |
| 3.2 牦牛MC1R基因克隆及生物信息学分析 | 第32-35页 |
| 3.2.1 牦牛MC1R基因的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 3.2.2 牦牛MC1R蛋白的理化性质预测 | 第33页 |
| 3.2.3 牦牛MC1R基因编码蛋白质亲水性与疏水性预测分析、蛋白信号肽和跨膜区分析 | 第33-34页 |
| 3.2.4 牦牛MC1R基因编码蛋白的系统发育分析 | 第34-35页 |
| 3.3 牦牛MITF基因克隆及生物信息学分析 | 第35-41页 |
| 3.3.1 牦牛MITF基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| 3.3.2 牦牛MITF-M蛋白的理化性质预测 | 第36-37页 |
| 3.3.3 牦牛MITF基因编码蛋白质亲水性与疏水性预测分析 | 第37页 |
| 3.3.4 牦牛MITF基因编码蛋白信号肽和跨膜区分析 | 第37-38页 |
| 3.3.5 牦牛MITF基因编码蛋白结构域和蛋白质功能位点预测 | 第38-39页 |
| 3.3.6 牦牛MITF基因编码蛋白的高级结构预测 | 第39-41页 |
| 3.3.7 牦牛MITF基因编码蛋白的系统发育分析 | 第41页 |
| 3.4 牦牛Agouti基因克隆及生物信息学分析 | 第41-47页 |
| 3.4.1 牦牛Agouti基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.4.2 牦牛Agouti蛋白的理化性质预测 | 第42-43页 |
| 3.4.3 牦牛Agouti基因编码蛋白质亲水性与疏水性预测分析 | 第43页 |
| 3.4.4 牦牛Agouti基因编码蛋白信号肽和跨膜区分析 | 第43-44页 |
| 3.4.5 牦牛Agouti基因编码蛋白结构域和蛋白质功能位点预测 | 第44-45页 |
| 3.4.6 牦牛Agouti基因编码蛋白的高级结构预测 | 第45-46页 |
| 3.4.7 牦牛Agouti基因编码蛋白的系统发育分析 | 第46-47页 |
| 3.5 牦牛MITF、Agouti基因多态性结果分析 | 第47-48页 |
| 3.5.1 牦牛MITF基因混合池测序及直接测序结果 | 第47-48页 |
| 3.5.2 牦牛Agouti基因混合池测序及直接测序结果 | 第48页 |
| 3.6 牦牛皮肤组织中MC1R、MITF、Agouti基因的表达水平分析 | 第48-54页 |
| 3.6.1 MC1R、MITF、Agouti基因在牦牛各组织的表达情况 | 第48-50页 |
| 3.6.2 荧光定量溶解曲线分析 | 第50-51页 |
| 3.6.3 MC1R、MITF、Agouti基因mRNA相对定量分析 | 第51-54页 |
| 第四部分 讨论 | 第54-60页 |
| 4.1 MC1R、MITF、Agouti基因克隆试验分析 | 第54-56页 |
| 4.1.1 MC1R基因克隆及其生物信息学分析 | 第54页 |
| 4.1.2 MITF基因的克隆及生物信息学分析 | 第54-55页 |
| 4.1.3 Agouti基因的克隆及生物信息学分析 | 第55-56页 |
| 4.2 Agouti、MITF基因多态性分析 | 第56-57页 |
| 4.2.1 Agouti基因多态性分析 | 第56-57页 |
| 4.2.2 MITF基因多态性分析 | 第57页 |
| 4.3 MC1R、MITF、Agouti基因表达量与牦牛毛色的关系 | 第57-60页 |
| 4.3.1 MC1R基因表达量与牦牛毛色的关系 | 第57-58页 |
| 4.3.2 MITF基因表达量与牦牛毛色的关系 | 第58-59页 |
| 4.3.3 Agouti基因表达量与牦牛毛色的关系 | 第59-60页 |
| 第五部分 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-74页 |
| 附录 | 第74-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 个人简介 | 第83-84页 |
| 导师简介 | 第84-85页 |
