| 英文缩略词表 | 第6-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 前言 | 第13-17页 |
| 材料与方法 | 第17-34页 |
| 1.材料 | 第17-20页 |
| 1.1 菌株及细胞株 | 第17页 |
| 1.2 质粒 | 第17页 |
| 1.3 细胞培养及转染试剂 | 第17页 |
| 1.4 分子生物学试剂盒 | 第17-18页 |
| 1.5 抗体 | 第18-20页 |
| 1.6 主要实验仪器 | 第20页 |
| 2.方法 | 第20-34页 |
| 2.1 质粒构建与表达鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2 慢病毒包装 | 第21页 |
| 2.3 基因敲低细胞系构建 | 第21-22页 |
| 2.4 细胞转染 | 第22页 |
| 2.5 Westernblot | 第22-23页 |
| 2.6 荧光实时定量RT-PCR | 第23-25页 |
| 2.7 染色质免疫共沉淀(ChIP)和Re-ChIP | 第25-26页 |
| 2.8 免疫共沉淀(Co-IP) | 第26-27页 |
| 2.9 纯化蛋白 | 第27-28页 |
| 2.10 GSTpull-down和Hispull-down | 第28页 |
| 2.11 內源Co-IP | 第28页 |
| 2.12 荧光素酶活性测定 | 第28-29页 |
| 2.13 质谱 | 第29页 |
| 2.14 小鼠胚胎解剖 | 第29页 |
| 2.15 小鼠胚胎成纤维细胞分离 | 第29-30页 |
| 2.16 鼠尾基因组提取和基因型鉴定 | 第30页 |
| 2.17 葡萄糖摄取、丙酮酸、乳酸、ATP及代谢酶活性检测 | 第30-31页 |
| 2.18 ECAR和OCR | 第31页 |
| 2.19 生长曲线 | 第31页 |
| 2.20 小鼠 | 第31页 |
| 2.21 小鼠葡萄糖摄取的PET成像 | 第31-32页 |
| 2.22 临床标本 | 第32页 |
| 2.23 miRNA原位杂交和免疫组化 | 第32页 |
| 2.24 主要数据库及分析软件 | 第32-33页 |
| 2.25 统计分析 | 第33-34页 |
| 结果 | 第34-89页 |
| 1.确定SIX1是调控肿瘤糖酵解基因的关键因子 | 第34-41页 |
| 1.1 RNA-seq转录组测序确定SIX1下游靶基因 | 第34-35页 |
| 1.2 SIX1敲低和过表达对糖酵解基因的转录和蛋白水平表达的调控 | 第35-39页 |
| 1.3 SIX1敲除对糖酵解基因的转录和蛋白水平表达的调控 | 第39-41页 |
| 2.SIX1促进糖酵解基因的启动子活性 | 第41-43页 |
| 2.1 SIX1结合在糖酵解基因的SIX1反应元件上 | 第41-43页 |
| 2.2 SIX1募集在糖酵解基因的启动子上 | 第43页 |
| 3.SIX1通过结合HBO1和AIB1促进糖酵解基因的表达 | 第43-53页 |
| 3.1 质谱分析SIX1的相互作用蛋白 | 第43-46页 |
| 3.2 SIX1与HBO1、AIB1存在相互作用 | 第46-47页 |
| 3.3 SIX1与HBO1、AIB1相互间的结合定位 | 第47-49页 |
| 3.4 SIX1通过HBO1、AIB1调控糖酵解基因的表达 | 第49-51页 |
| 3.5 SIX1与HBO1、SIX1与AIB1共同募集在糖酵解基因的启动子上 | 第51-52页 |
| 3.6 SIX1通过HBO1介导的H4K5乙酰化或AIB1介导的H3K4乙酰化促进糖酵解基因转录 | 第52-53页 |
| 4.miR-548a-3p通过抑制SIX1调控糖酵解基因的表达 | 第53-58页 |
| 4.1 软件预测并筛选靶向SIX1的miroRNA | 第53-54页 |
| 4.2 miR-548a-3p调控SIX1的表达 | 第54-55页 |
| 4.3 miR-548a-3p结合在SIX1的3’-UTR区 | 第55-56页 |
| 4.4 miR-548a-3p通过结合在SIX1的3’-UTR区抑制SIX1的表达 | 第56页 |
| 4.5 Anti-miR-548a-3p促进SIX1及糖酵解基因的表达 | 第56-57页 |
| 4.6 miR-548a-3p通过SIX1调控糖酵解基因的表达 | 第57-58页 |
| 5.miR-548a-3p/SIX1轴调控肿瘤糖酵解和细胞生长 | 第58-63页 |
| 5.1 miR-548a-3p通过SIX1抑制肿瘤糖酵解 | 第58-61页 |
| 5.2 SIX1通过HBO1、AIB1调控肿瘤糖酵解 | 第61-63页 |
| 6.缺氧条件下miR-548a-3p/SIX1轴调控糖酵解 | 第63-67页 |
| 7.miR-548a-3p/SIX1轴通过糖酵解调控肿瘤细胞生长 | 第67-70页 |
| 7.1 miR-548a-3p通过SIX1调控肿瘤细胞生长 | 第67-69页 |
| 7.2 SIX1通过增强糖酵解、ATP产生从而促进细胞生长 | 第69-70页 |
| 7.3 SIX1有利于缺氧对细胞生长的诱导 | 第70页 |
| 8.miR-548a-3p/SIX1轴调控体内糖酵解和肿瘤生长 | 第70-76页 |
| 8.1 miR-548a-3p/SIX1轴调控肿瘤生长、葡萄糖摄取、乳酸生成 | 第70-72页 |
| 8.2 SIX1敲除抑制机体葡萄糖摄取 | 第72-73页 |
| 8.3 miR-548a-3p/SIX1与乳腺癌病人的葡萄糖摄取相关 | 第73-75页 |
| 8.4 miR-548a-3p、SIX1抗体特异性鉴定 | 第75-76页 |
| 9.肿瘤相关的SIX1点突变增强SIX1促进糖酵解和肿瘤生长的能力 | 第76-82页 |
| 9.1 SIX1-Q117R点突变增强SIX1对糖酵解基因表达的调控 | 第76页 |
| 9.2 SIX1-Q117R点突变促进SIX1募集在糖酵解基因启动子上 | 第76-77页 |
| 9.3 SIX1-Q117R点突变不改变SIX1的细胞定位 | 第77-78页 |
| 9.4 缺氧对SIX1(Q177R)介导的糖酵解基因转录的影响 | 第78-79页 |
| 9.5 SIX1-Q117R点突变增强SIX1对糖酵解的调控 | 第79-80页 |
| 9.6 SIX1-Q117R点突变增强SIX1对肿瘤细胞生长的调控 | 第80-81页 |
| 9.7 乳腺癌标本中,SIX1(Q177R)突变筛查 | 第81-82页 |
| 10.miR-548a-3p/SIX1轴在乳腺癌中的临床分析 | 第82-89页 |
| 10.1 miR-548a-3p/SIX1轴与糖酵解基因相关 | 第82-84页 |
| 10.2 HIF-1α与SIX1、糖酵解基因正相关 | 第84-85页 |
| 10.3 HBO1与AIB1表达呈正相关 | 第85-86页 |
| 10.4 SIX1在乳腺癌、肝癌中过表达 | 第86-87页 |
| 10.5 miR-548a-3p的高表达与良好预后相关 | 第87-89页 |
| 讨论 | 第89-92页 |
| 结论与展望 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 作者在学期间取得的学术成果 | 第101-103页 |
| 主要简历 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
