| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-30页 |
| 第一章 miRNA 的合成及作用机制 | 第13-22页 |
| 1.1 动物体内 miRNA 的生物合成 | 第13-17页 |
| 1.1.1 动物体内 miRNA 的生物合成的步骤 | 第13页 |
| 1.1.2 动物体内参与 miRNA 生物的酶 | 第13-16页 |
| 1.1.3 Mirtron 的生物合成 | 第16页 |
| 1.1.4 miRNA 和 miRNA* | 第16-17页 |
| 1.2 miRNA 发挥作用的机制 | 第17-20页 |
| 1.2.1 miRNA 作用的靶位点 | 第17-18页 |
| 1.2.2 miRNA 作用的机制 | 第18-19页 |
| 1.2.3 miRNA 发挥作用的场所(P 体) | 第19-20页 |
| 1.3 miRNA 的降解 | 第20-22页 |
| 1.3.1 miRNA 的半衰期 | 第20页 |
| 1.3.2 动物体中 miRNA 降解的机制 | 第20页 |
| 1.3.3 miRNA 稳定性的保护 | 第20-22页 |
| 第二章 miRNA 与骨骼肌 | 第22-26页 |
| 2.1 miRNA 与肌细胞的增殖和分化 | 第22页 |
| 2.2 miRNA 与肌纤维类型 | 第22-23页 |
| 2.3 miRNA 与肌肉的肥大与萎缩 | 第23-24页 |
| 2.4 miRNA 与肌肉的再生 | 第24-25页 |
| 2.5 miRNA 与肌肉疾病 | 第25-26页 |
| 第三章 miR-199a 的研究进展 | 第26-30页 |
| 3.1 miR-199a 的生物学信息 | 第26页 |
| 3.2 miR-199a 的生物学功能 | 第26-30页 |
| 3.2.1 miR-199a 在心肌中的作用 | 第26-27页 |
| 3.2.2 miR-199a 与软骨的形成 | 第27页 |
| 3.2.3 miR-199a 与肿瘤的产生 | 第27-28页 |
| 3.2.4 miRNA-199a 与骨骼肌发生 | 第28-30页 |
| 实验研究 | 第30-55页 |
| 第四章 miR-199a-3p 的组织分布及在成肌细胞分化过程中的表达 | 第30-35页 |
| 4.1 实验材料及方法 | 第30-31页 |
| 4.1.1 实验动物及细胞 | 第30页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 4.1.3 C2C12 成肌细胞的培养及诱导分化 | 第30-31页 |
| 4.1.4 TRIzol 法提取组织或细胞总 RNA | 第31页 |
| 4.1.5 RT-qPCR 检测 miR-199a-3p 的表达 | 第31页 |
| 4.2 结果 | 第31-34页 |
| 4.2.1 miR-199a-3p 序列的同源性性比对 | 第31-32页 |
| 4.2.2 miR-199a-3p 的组织分布 | 第32-33页 |
| 4.2.3 miR-199a-3p 在 C2C12 成肌细胞分化过程中的时序表达 | 第33-34页 |
| 4.3 讨论 | 第34-35页 |
| 第五章 过表达 miR-199a-3p 抑制成肌分化 | 第35-42页 |
| 5.1 实验所用的材料及方法 | 第35-37页 |
| 5.1.1 C2C12 成肌细胞的培养及诱导分化 | 第35-36页 |
| 5.1.2 miR-199a-3p 模拟物转染 C2C12 成肌细胞系 | 第36页 |
| 5.1.3 免疫荧光检测肌管的形成 | 第36页 |
| 5.1.4 RT-qPCR 检测标记基因 mRNA 的变化 | 第36-37页 |
| 5.2.5 WB 技术检测标记基因蛋白的变化 | 第37页 |
| 5.2 结果 | 第37-41页 |
| 5.2.1 转染 miR-199a-3p mimic 后超表达效率的检测 | 第37-38页 |
| 5.2.2 超表达 miR-199a-3p 抑制肌管的形成 | 第38-39页 |
| 5.2.3 超表达 miR-199a-3p 抑制标记基因 mRNA 的表达 | 第39-40页 |
| 5.2.4 超表达 miR-199a-3p 抑制成肌细胞分化标记基因蛋白的表达 | 第40-41页 |
| 5.3 结论 | 第41-42页 |
| 第六章 干扰 miR-199a-3p 促进成肌分化 | 第42-46页 |
| 6.1 实验所用材料和方法 | 第42页 |
| 6.1.1 C2C12 成肌细胞的培养及诱导分化 | 第42页 |
| 6.1.2 miR-199a-3p inhibitor 转染 C2C12 成肌细胞系 | 第42页 |
| 6.1.3 免疫荧光检测肌管的形成 | 第42页 |
| 6.1.4 RT-qPCR 检测标记基因 mRNA 的变化 | 第42页 |
| 6.1.5 WB 技术检测标记基因蛋白的变化 | 第42页 |
| 6.2 结果 | 第42-45页 |
| 6.2.1 miR-199a-3p 干扰效率的检测 | 第42-43页 |
| 6.3.2 干扰 miR-199a-3p 促进肌管的形成 | 第43-44页 |
| 6.2.3 干扰 miR-199a-3p 促进成肌分化标记基因 mRNA 的表达 | 第44页 |
| 6.2.4 干扰 miR-199a-3p 促进成肌细胞分化标记基因蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 6.3 讨论 | 第45-46页 |
| 第七章 miR-199a-3p 靶定 mTOR 信号通路 | 第46-55页 |
| 7.1 实验所用材料与方法 | 第46-49页 |
| 7.1.1 实验动物及细胞 | 第46-47页 |
| 7.1.2 荧光素酶报告载体的构建 | 第47-48页 |
| 7.1.3 miR-199a-3p 靶基因的双荧光素酶报告基因分析 | 第48-49页 |
| 7.1.4 miR-199a-3p 在成肌细胞转中对其靶基因 mRNA 表达水平的变化 | 第49页 |
| 7.1.5 miR-199a-3p 在成肌细胞中对 mTOR 信号通路的影响 | 第49页 |
| 7.2 结果 | 第49-53页 |
| 7.2.1 利用软件预测 miR-199-3p 的靶基因 | 第49-50页 |
| 7.2.2 miR-199-3p 靶基因荧光素酶报告载体的构建 | 第50-51页 |
| 7.2.3 miR-199a-3p 影响其靶基因荧光素酶活性 | 第51-52页 |
| 7.2.4 miR-199a-3p 影响其靶基因 mRNA 的表达 | 第52页 |
| 7.2.5 miR-199a-3p 影响 mTOR 信号通路 | 第52-53页 |
| 7.3 讨论 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55页 |
| 创新点 | 第55页 |
| 进一步的研究计划 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录 | 第64-77页 |
| 附录 1 细胞和分子实验所用试剂的配制 | 第64-66页 |
| 附录 2 细胞和组织中 RNA 的提取 | 第66-67页 |
| 附录 3 免疫荧光检测肌管形成 | 第67-68页 |
| 附录 4 蛋白质提取技术 | 第68-69页 |
| 附录 5 Western blot 分析 | 第69-71页 |
| 附录 6 质粒小量提取 | 第71-72页 |
| 附录 7 DNA 片段胶回收 | 第72-73页 |
| 附录 8 DH5α感受态细胞的转化 | 第73-74页 |
| 附录 9 双荧光素酶报告基因系统检测分析 | 第74-75页 |
| 附录 10 荧光素酶报告基因测序结果 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
