| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-25页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展 | 第13-22页 |
| 1.1 病原学 | 第14-18页 |
| 1.1.1 PRRSV 的分类地位及理化特性 | 第14页 |
| 1.1.2 PRRSV 的细胞培养 | 第14-15页 |
| 1.1.3 PRRSV 基因组编码蛋白及其功能 | 第15-17页 |
| 1.1.4 PRRSV 遗传变异 | 第17-18页 |
| 1.2 PRRS的流行病学 | 第18-19页 |
| 1.3 PRRS的症状及病理变化 | 第19页 |
| 1.3.1 PRRS的临床症状 | 第19页 |
| 1.3.2 PRRS的病理变化 | 第19页 |
| 1.4 PRRSV免疫学反应 | 第19-21页 |
| 1.4.1 体液免疫反应 | 第19-20页 |
| 1.4.2 细胞免疫反应 | 第20-21页 |
| 1.5 PRRSV的致病机制 | 第21页 |
| 1.6 PRRSV的预防及控制 | 第21-22页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒与细胞凋亡 | 第22-25页 |
| 2.1 PRRSV诱导细胞凋亡 | 第22页 |
| 2.2 PRRSV 诱导凋亡的途径 | 第22-23页 |
| 2.3 PRRSV GP5 与细胞凋亡 | 第23-24页 |
| 2.4 本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 试验研究 | 第25-55页 |
| 第三章 表达 PRRSV GP5、GP5~(△84-96)和 GP5~(△97-119)重组质粒的构建与稳转细胞系的筛选与鉴定 | 第25-37页 |
| 3.1 材料 | 第25-32页 |
| 3.1.1 细胞及 PRRSV 毒株 | 第25页 |
| 3.1.2 试剂及耗材 | 第25页 |
| 3.1.3 质粒及受体菌 | 第25-26页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第26-27页 |
| 3.1.5 主要设备及仪器 | 第27页 |
| 3.1.6 Marc-145 细胞的复苏、培养与冻存 | 第27页 |
| 3.1.7 PRRSV 的扩繁 | 第27页 |
| 3.1.8 病毒滴度的测定 | 第27-28页 |
| 3.1.9 引物的设计和合成 | 第28页 |
| 3.1.10 真核表达载体的构建及鉴定 | 第28-30页 |
| 3.1.11 嘌呤霉素（puromycin）最佳筛选浓度确定 | 第30-31页 |
| 3.1.12 稳定表达 PRRSV GP5、GP5 84-96或 GP5 97-119细胞的筛选 | 第31页 |
| 3.1.13 稳定表达 PRRSV GP5、GP5 84-96或 GP5 97-119细胞的鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2 结果与分析 | 第32-35页 |
| 3.2.1 目的基因片段的克隆 | 第32页 |
| 3.2.2 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.3 稳定表达 PRRSV GP5、GP5~(△84-96)或 GP5~(△97-119)细胞的筛选与鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2.4 表达 PRRSV GP5、GP5~(△84-96)或 GP5~(△97-119)细胞的 mRNA 水平鉴定 | 第34页 |
| 3.2.5 表达 PRRSV GP5、GP5~(△84-96)或 GP5~(△97-119)细胞的蛋白水平鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3 讨论 | 第35-36页 |
| 3.4 小结 | 第36-37页 |
| 第四章 PRRSV GP5 蛋白亚细胞定位及其对细胞周期和凋亡的影响 | 第37-46页 |
| 4.1 材料 | 第37-38页 |
| 4.1.1 病毒株与细胞株 | 第37页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第38页 |
| 4.2 方法 | 第38-40页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第38页 |
| 4.2.2 CCK-8 法检测细胞的增殖 | 第38页 |
| 4.2.3 GP5 的亚细胞定位 | 第38页 |
| 4.2.4 流式细胞仪检测细胞周期 | 第38-39页 |
| 4.2.5 实时荧光定量 PCR | 第39-40页 |
| 4.2.6 Western blot 检测 casepase-3 的表达 | 第40页 |
| 4.2.7 DNA 片段化检测 | 第40页 |
| 4.3 结果与分析 | 第40-45页 |
| 4.3.1 稳定表达 PRRSV GP5、GP5~(△84-96)或 GP5~(△97-119)对细胞增殖的影响 | 第40-41页 |
| 4.3.2 GP5、GP5~(△84-96)和 GP5~(△97-119)的细胞定位 | 第41-42页 |
| 4.3.3 GP5~(△97-119)的表达将部分细胞阻滞于 G2/M 期 | 第42页 |
| 4.3.4 荧光定量 PCR 检测 Bax 与 Bcl-2 的表达水平 | 第42-43页 |
| 4.3.5 Westernblot 检测 Caspase-3 的活性 | 第43-44页 |
| 4.3.6 DNA ladder 分析 | 第44-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45页 |
| 4.5 小结 | 第45-46页 |
| 第五章 GP5 和截短 GP5 的表达对病毒复制影响 | 第46-55页 |
| 5.1 材料 | 第46-47页 |
| 5.1.1 病毒株与细胞株 | 第46页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第46-47页 |
| 5.2 方法 | 第47-48页 |
| 5.2.1 GP5 和截短 GP5 的表达对病毒复制影响检测 | 第47-48页 |
| 5.2.2 GP5~(△84-96)的表达对不同 PRRSV 毒株复制的影响 | 第48页 |
| 5.3 结果与分析 | 第48-53页 |
| 5.3.1 细胞病变（CPE）观察 | 第48-49页 |
| 5.3.2 间接免疫荧光试验（IFA）检测结果 | 第49页 |
| 5.3.3 TCID50测定结果 | 第49-50页 |
| 5.3.4 绝对定量检测细胞中病毒 N 基因 | 第50-51页 |
| 5.3.5 Western blotting 检测病毒 N 蛋白的表达 | 第51页 |
| 5.3.6 GP5 和截短 GP5 的稳定表达影响了干扰素的表达 | 第51-52页 |
| 5.3.7 GP5 84-96的表达可以抑制不同 PRRSV 毒株的复制 | 第52-53页 |
| 5.4 讨论 | 第53-54页 |
| 5.5 小结 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 缩略语与中英文对照 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
