| 摘要 | 第5-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 1.绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 前言 | 第13-14页 |
| 1.2 角蛋白的微生物降解 | 第14-17页 |
| 1.2.1 角蛋白降解菌 | 第14-16页 |
| 1.2.2 角蛋白酶研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 细菌蛋白代谢通道研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 细菌肽转运蛋白 | 第17-20页 |
| 1.3.2 细菌中的类内吞作用 | 第20页 |
| 1.4 转录组测序技术的发展及应用 | 第20-21页 |
| 1.4.1 转录组测序技术的发展 | 第20-21页 |
| 1.4.2 转录组测序技术的应用 | 第21页 |
| 1.4.3 测序技术存在的问题及发展趋势 | 第21页 |
| 1.5 选题意义及主要内容 | 第21-23页 |
| 2.S.maltophilia DHHJ菌株利用角蛋白单体生理机制研究 | 第23-41页 |
| 2.1 引言 | 第23-24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.2.1 羽毛及羽毛粉 | 第24页 |
| 2.2.2 供试细菌与质粒 | 第24页 |
| 2.2.3 主要药品与试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.4 主要实验仪器与设备 | 第25页 |
| 2.2.5 主要溶液及培养基 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.3.1 水溶性角蛋白单体的提取 | 第26页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第26-27页 |
| 2.3.3 蛋白质浓度的测定 | 第27页 |
| 2.3.4 各物质对S.maltophilia DHHJ菌株结合角蛋白单体的竞争性作用研究 | 第27-29页 |
| 2.3.5 不同因素对S.maltophilia DHHJ菌株产角蛋白酶活的影响 | 第29页 |
| 2.3.6 酶解产物诱导S.maltophilia DHHJ菌株产角蛋白酶活 | 第29-30页 |
| 2.3.7 角蛋白单体的外源表达与纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.8 角蛋白酶酶活测定 | 第31页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第31-40页 |
| 2.4.1 化学法提取角蛋白单体水溶液 | 第31-32页 |
| 2.4.2 角蛋白单体水溶液蛋白浓度的测定 | 第32-33页 |
| 2.4.3 角蛋白单体荧光标记 | 第33页 |
| 2.4.4 荧光强度变化值检测实验 | 第33-37页 |
| 2.4.5 各因素影响S.maltophilia DHHJ菌株产角蛋白酶活性实验 | 第37-38页 |
| 2.4.6 角蛋白外源表达及诱导产酶 | 第38-40页 |
| 2.5 本章小结 | 第40-41页 |
| 3.S.maltophilia DHHJ菌株RNA转录组测序 | 第41-56页 |
| 3.1 引言 | 第41-42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-43页 |
| 3.2.1 羽毛及羽毛粉 | 第42页 |
| 3.2.2 供试细菌 | 第42页 |
| 3.2.3 主要药品与试剂 | 第42页 |
| 3.2.4 主要仪器与设备 | 第42-43页 |
| 3.2.5 培养基 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-46页 |
| 3.3.1 细菌转录组测序样本的制备 | 第43页 |
| 3.3.2 样本RNA的抽提与质检 | 第43-44页 |
| 3.3.3 样本的转录组测序(RNA-seq) | 第44页 |
| 3.3.4 生物信息分析 | 第44-46页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第46-55页 |
| 3.4.1 样本角蛋白酶活性验证 | 第46页 |
| 3.4.2 总RNA质量检测 | 第46-47页 |
| 3.4.3 文库质检 | 第47-48页 |
| 3.4.4 测序序列质量评估 | 第48页 |
| 3.4.5 数据分析 | 第48-55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 4.qRT-PCR验证基因表达量 | 第56-62页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.2.1 羽毛及羽毛粉 | 第56页 |
| 4.2.2 供试细菌 | 第56页 |
| 4.2.3 药品与试剂 | 第56-57页 |
| 4.2.4 仪器设备 | 第57页 |
| 4.2.5 培养基 | 第57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-60页 |
| 4.3.1 细菌RNA的提取 | 第57页 |
| 4.3.2 候选基因的挑选 | 第57-58页 |
| 4.3.3 qPCR引物设计 | 第58页 |
| 4.3.4 反转录PCR(RT-PCR) | 第58-59页 |
| 4.3.5 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第59-60页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第60-61页 |
| 4.5 本章小结 | 第61-62页 |
| 5.结论与展望 | 第62-64页 |
| 5.1 结论 | 第62-63页 |
| 5.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
