| 符号说明 | 第6-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 前言 | 第14-21页 |
| 1.1 口蹄疫简介 | 第14-15页 |
| 1.2 口蹄疫病毒的分子生物学特征 | 第15-17页 |
| 1.2.1 FMDV基因组基本结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 FMDV基因组RNA5'非编码区功能 | 第16-17页 |
| 1.2.2.1 内部核糖体进入位点(IRES) | 第16页 |
| 1.2.2.2 IRES调控的翻译类型 | 第16-17页 |
| 1.2.3 FMDV基因组RNA3'非编码区功能 | 第17页 |
| 1.2.4 Ploy(A)尾 | 第17页 |
| 1.3 FMDV 3C蛋白酶简介 | 第17-19页 |
| 1.3.1 3C蛋白酶结构 | 第18页 |
| 1.3.2 3C蛋白酶生物学功能 | 第18-19页 |
| 1.3.2.1 3C蛋白酶对多聚蛋白前体裂解的加工作用 | 第18页 |
| 1.3.2.2 3C蛋白酶调控宿主蛋白的翻译 | 第18-19页 |
| 1.3.2.3 3C蛋白酶切割宿主组蛋白 | 第19页 |
| 1.3.2.4 3C蛋白酶抑制干扰素信号通路 | 第19页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 材料与方法 | 第21-42页 |
| 2.1 材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 细胞与菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-23页 |
| 2.1.4 主要药物试剂 | 第23页 |
| 2.1.5 主要试剂配置 | 第23-27页 |
| 2.1.5.1 细菌培养试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.5.2 DNA电泳试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.5.3 重组蛋白诱导表达及纯化试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.5.4 SDS-PAGE电泳试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.5.5 Western blotting试剂 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-42页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第27-29页 |
| 2.2.2 3C基因的扩增及纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.2.1 基因扩增 | 第29页 |
| 2.2.2.2 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第29页 |
| 2.2.2.3 PCR产物胶回收 | 第29-30页 |
| 2.2.3 重组质粒的构建及鉴定 | 第30-33页 |
| 2.2.3.1 双酶切 | 第30-31页 |
| 2.2.3.2 连接转化构建重组质粒 | 第31-33页 |
| 2.2.4 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第33-35页 |
| 2.2.4.1 FMDV 3C基因的原核表达及检测 | 第33页 |
| 2.2.4.2 3C重组蛋白的大量表达及纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.4.3 纯化后重组蛋白浓度的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.5 3C多克隆抗体的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.5.1 3C重组蛋白的纯化及浓缩 | 第35页 |
| 2.2.5.2 3C制备抗血清 | 第35-36页 |
| 2.2.6 多克隆抗体特性检测 | 第36-38页 |
| 2.2.6.1 抗体效价测定 | 第36-37页 |
| 2.2.6.2 Western blotting检测多克隆抗体与蛋白的反应性 | 第37-38页 |
| 2.2.7 多克隆抗体的应用 | 第38-42页 |
| 2.2.7.1 HEK-293T细胞复苏 | 第38页 |
| 2.2.7.2 细胞传代 | 第38-39页 |
| 2.2.7.3 细胞转染 | 第39-40页 |
| 2.2.7.4 将多克隆抗体应用于细胞间接免疫荧光 | 第40页 |
| 2.2.7.5 将多克隆抗体应用于Western blotting检测 | 第40-42页 |
| 结果与分析 | 第42-51页 |
| 3.1 FMDV 3C基因的扩增结果 | 第42-43页 |
| 3.2 重组质粒pET-28a-3C的鉴定结果 | 第43页 |
| 3.3 重组蛋白pET-28a-3C的诱导表达结果检测 | 第43-44页 |
| 3.4 重组蛋白的纯化、鉴定及浓度测定 | 第44-46页 |
| 3.5 重组蛋白的超滤及浓缩 | 第46页 |
| 3.6 多克隆抗体特性检测 | 第46-48页 |
| 3.6.1 抗体效价测定 | 第46-47页 |
| 3.6.2 抗体与3C重组蛋白反应性检测 | 第47-48页 |
| 3.7 多克隆抗体的应用 | 第48-51页 |
| 3.7.1 间接免疫荧光检测结果 | 第48-49页 |
| 3.7.2 Western blotting检测结果 | 第49-51页 |
| 讨论 | 第51-56页 |
| 4.1 FMDV 3C的原核表达 | 第51-52页 |
| 4.2 重组蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| 4.3 3C多克隆抗体的制备 | 第53-54页 |
| 4.4 3C多克隆抗体的鉴定 | 第54-55页 |
| 4.5 制备3C多克隆抗体的意义 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
